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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Caracterização do complexo proteico da RBP CAPRIN-1
Title Alternative: Characterization of the protein complex of the RBP CAPRIN-1
Author: Alonso, Laura, 1988-
Advisor: Massirer, Katlin Brauer, 1975-
Abstract: Resumo: Proteínas de ligação à RNA (RNA-Binding Proteins RBPs) fazem parte de complexos proteicos a fim de guiar o metabolismo de mRNAs e exercerem regulação de eventos pós-transcricionais como localização de mRNA e tradução. CAPRIN1 é uma RBP citoplasmática capaz de induzir grânulos de estresse citoplasmáticos e está presente em complexos dendríticos com função de transporte para tradução localizada. Para tentar elucidar a função molecular de CAPRIN1 em grânulos citoplasmáticos, foi caracterizado o complexo proteico atuante com CAPRIN1. A fim de identificar os interagentes no complexo, primeiramente foi superexpressa a proteína de fusão FLAG-CAPRIN1 em células humanas HEK293T, posteriormente CAPRIN1 foi imunoprecipitada com anticorpo anti-FLAG e seus interagentes foram analisados por espectrometria de massas. Esta técnica identificou 62 proteínas co-precipitadas, das quais, 63% (36) são RBPs com função enriquecida em processamento de mRNA e regulação de estabilização de mRNA. Como uma das funções sugeridas para grânulos de estresse é a triagem de mRNAs para estabilização e degradação por grânulos de degradação (P-bodies), escolhemos 9 interações com proteínas com função em regulação de estabilização para avaliarmos as interações. A interação com IGF2BP1 e PABPC1, foram confirmadas por co-imunoprecipitação, e IGF2BP1 interage com CAPRIN1 de modo dependente de RNA. Juntos, estes resultados indicam que CAPRIN1 realiza importante função em estabilização de mRNAs-alvo

Abstract: RNA binding proteins (RBPs) can be part of large protein complexes and they function by guiding mRNA metabolism and by regulating post-transcriptional events such as mRNA localization and translation. CAPRIN1 is a cytoplasmatic RBP capable of inducing cytoplasmic stress granules and present in dendritic complexes for localized translation. In order to understand the molecular role of CAPRIN1 in cytoplasmic granules we characterized its protein complex. To identify the partners in the complex, we first overexpressed FLAG-CAPRIN1 in human HEK293T cells, then immunoprecipitated CAPRIN1 with a anti-FLAG antibody and assayed protein interactors with mass-spectrometry. This approach identified 62 co-precipitated proteins, of which 63% (36) are RBPs with an enriched function in mRNA processing and regulation of mRNA stability. As one of the suggested functions of stress granules is mRNAs triage for stabilization or degradation by cellular P-bodies, we have chosen 9 interactors with function in regulating stability for binding evaluation. The interaction with IGF2BP1 and PABPC1, were confirmed by co-immunoprecipitation, and IGF2BP1 interacts with CAPRIN1 in a RNA-dependent manner. Taken together, these results indicate that CAPRIN1 functions importantly in mRNA stabilization
Subject: Grânulos citoplasmáticos
Proteínas de ligação a RNA
Proteína CAPRIN1 humana
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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