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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Detecção sorológica, molecular e caracterização dos Paramixovírus aviários do tipo 1 (classe I e classe II) em aves silvestres e sinantrópicas = Serological and molecular, detection and characterization of avian Paramyxovirus type 1 (class I and class II) in wild and synanthropic birds
Title Alternative: Serological and molecular, detection and characterization of avian Paramyxovirus type 1 (class I and class II) in wild and synanthropic birds
Author: Scagion, Guilherme Pereira, 1988-
Advisor: Arns, Clarice Weis, 1956-
Abstract: Resumo: Os paramixovírus aviários do tipo 1 (APMV-1) pertencem à família Paramyxoviridae, subfamília Paramyxovirinae, gênero Avulavirus. O APMV-1 causador da doença de Newcastle (DN) é considerada uma das maiores causas de perdas econômicas para a avicultura mundial, devido a alta mortalidade e os embargos econômicos envolvidos. A compreensão da epidemiologia de infecções causadas por APMV-1 é dificultada pelo fato de que estes vírus não produzem sinais clínicos e frequentemente não são detectados por métodos de diagnóstico rápidos. As aves silvestres parecem ser um importante reservatório desses vírus. Recentemente, a análise dos tamanhos de genoma e sequências de genes revelou dois clados distintos dentro APMV-1: classe I e II. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de APMV-1 em aves selvagens e sinantrópicas através de testes moleculares e sorológicos. Para este fim, 387 amostras de aves (194 amostras de orofaringe e 193 esfregaços de cloaca) pertencentes a 37 espécies de 12 ordens foram testados. Um ensaio em tempo real de RT-PCR (RRT-PCR), para a detecção simultânea de vírus de classe I e classe II foi utilizado para a detecção molecular de genes L e M, respectivamente. Outros sete testes RT-PCR convencional direcionados ao gene de fusão (F) e ao gene de hemaglutinina-neuraminidase (HN) foram testados em comparação com a sensibilidade analítica do ensaio de RRT-PCR. Estes RT-PCR foram também utilizados para sequenciamentos das amostras positivas. Assim, das 387 amostras testadas 10 foram detectadas como positivas pelos RRT-PCR. Entre as amostras positivas, encontra-se, uma proveniente de Sporophila frontalis ave ameaçada de extinção, na qual ainda não se sabe totalmente o efeito do AMPV-1. Foi possível sequenciar três amostras com o gene HN e onze com gene F, estas sequências foram agrupadas dentro do genótipo II, classe II de APMV-1. No entanto, este grupo de amostras brasileiras parece representar um novo cluster dentro deste genótipo. Além disso, em um ELISA competitivo testado, obteve-se uma sensibilidade analítica e especificidade perto de 100% e 10% reprodutibilidade. No total, 123 soros foram testados por ELISA e pelo teste de Inibição da hemaglutinação (HI). A frequência de ocorrência, utilizando HI foi de 22,73% e 19,51% no ELISA competitivo. Essas duas técnicas tiveram uma correlação de 0,62. Portanto, nosso estudo reitera a importância de continuar a vigilância em aves selvagens para aumentar o conhecimento sobre a epidemiologia da AMPV -1 no Brasil

Abstract: The avian paramyxovirus type 1 (APMV-1) belongs to family Paramyxoviridae, subfamily Paramyxovirinae, genus Avulavirus. APMV-1 that causes Newcastle disease (ND) is considered a major cause of economic losses to the global poultry industry, because of high mortality and economic embargoes. The Understanding of epidemiology of infections caused by APMV-1 is hampered by the fact that these viruses do not produce clinical signs and often are not detected by rapid diagnostic methods.Wild birds seem to be an important reservoir of these viruses. Recently, analysis of the genome sizes and sequences of genes has revealed two distinct clades within APMV-1: class I and II. The present study aimed to investigate the presence of APMV-1 in wild and feral birds through molecular and serological tests. To this end, 387 samples (194 oropharyngeal swabs and 193 cloacal swabs) of 37 species belonging to 12 orders of birds were tested. A test of real time RT-PCR (RRT-PCR), for the simultaneous detection of viruses of class I and class II was used for molecular detection of genes L and M, respectively. Seven others conventional RT-PCR tests targeting fusion (F) and hemagglutinin-neuraminidase (HN) genes were tested and analytical sensitivity compared with RRT-PCR assay. Those RT-PCR were used for DNA sequencing. Ten out of 387 tested samples were positive by RRT-PCR. Among the positive samples were found, one from Sporophila frontalis an endangered birds species, for which is not yet fully know about AMPV-1 effect. Three samples sequences with the HN gene and eleven with gene F were analyzed phylogenetically and grouped within the genotype II, class II of APMV-1. However, this brazilian group seems to represent a new cluster within this genotype. A competitive ELISA test was tested that performed analytical sensitivity and specificity close to 100% and 10% reproducibility using reference sera. In total, 123 sera were tested by ELISA and also tested by HI test. The occurrence frequency in birds, Anseriforms, especially was 22,73% and 19,51% using HI and ELISA tests, respectively. Those two techniques had a correlation of 0.62. Therefore, our study reiterates the importance of continuing surveillance in wild birds to increase knowledge about epidemiology of AMPV -1 in Brazil
Subject: Vírus da doença de Newcastle
Ave selvagem
Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa
Reação em cadeia da polimerase em tempo real
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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