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Type: DISSERTAÇÃO
Degree Level: Mestrado
Title: Isolamento parcial de frações proteicas plasmaticas de ratos com tumor de Walker 256 associadas as alterações da fragilidade osmotica de hemacias
Author: Gregorini, Claudia Cristina
Advisor: Cavalcanti, Tereza Cristina Samico
Abstract: Resumo: A anemia sem hemorragia em ratos portadores do tumor de Walker 256 (W256) é um sintoma característico observado durante a progressão do câncer. Resultados preliminares mostraram duas atividades opostas no sangue total de portadores deste tumor. Uma delas diminui e a outra aumenta a fragilidade osmótica (FO) das hemácias de ratos. A diminuição da FO de hemácias foi obtida quando ratos foram inoculados com a variante A (agressiva) do W256 e o efeito oposto quando foi usada a variante AR (regressiva). O objetivo deste trabalho foi o de confirmar estes resultados e, se possível, isolar os componentes plasmáticos responsáveis pelas mudanças na FO de hemácias de ratos portadores de tumor. Ratos machos Wistar com 8 semanas de vida foram submetidos ao modelo de crescimento tumoral (4 inoculações subcutâneas (sc) simultâneas com 5x106 células A ou AR/sítio) usado para simular o estágio metastático terminal do câncer. Todos os animais foram esplenectomizados e inoculados no dia zero. Amostras de sangue total dos ratos portadores dos tumores A ou AR foram coletados aos O, 4 e 10 dias pós-esplenectomia e inoculações. Alíquotas dos plasmas foram fracionadas com sulfato de amônio. Com isto foram obtidas as frações sobrenadante 60% (560), precipitado 60% (P60) e precipitado 60-80% (P60-80). A FO foi determinada aos O, 4 e 10 dias no sangue total dos portadores de tumor ou nas hemácias provenientes de rato normal incubada a 37°C durante 30, 120 e 240 minutos, com o plasma total e suas frações. Finalmente, o plasma total e frações foram submetidos a SDS-PAGE para identificação de prováveis componentes protéicos responsáveis pelas alterações da FO das células vermelhas. Todas as comparações foram realizadas contra o plasma total e frações de ratos controles. Assim, foi observado que o modelo usado é muito adequado para simular a fase metastática do câncer. O aumento da FO das hemácias não estava associado com o desenvolvimento da anemia produzido por ambas as variantes celulares do W256. Visto que, na fase grave da doença (10 dias), quando a anemia nos portadores da variante A (5,2±0,4 gHb/dL) foi maior do que a dos portadores da variante AR (6,7 ± 0,8 gHb/dL) não foi observado aumento na FO de hemácias de ratos portadores da variante A do W256. O fracionamento com o sulfato de amônio mostrou dois componentes protéicos capazes de induzir aumento significante (P<0,05) nas hemácias de ratos normais. O primeiro, observado em ambas as variantes do W256, precipitou a 60% de saturação, presente na fase inicial do crescimento tu moral (4 dias) e o segundo precipitou a 80%, aparecendo tardiamente (10 dias) somente nos portadores da variante AR. Além disto, no plasma destes animais também foi observado aumento da FO associado com as frações P60% (massa molecular alta) e S60% e P60-80% (massa molecular baixa). Esta característica pode refletir a interação tumor/hospedeiro e o comportamento regressivo da variante AR. A análise da SDS-PAGE do plasma total e frações permitiu a identificação de duas bandas protéicas (Mr = 66 e > 116). O aumento destas bandas em ambos os portadores do W256 bem como as suas alterações temporais impediram o estabelecimento da correlação entre as mudanças da FO de hemácias de rato e o câncer experimental

Abstract: Anemia without hemorrhage in tumor-bearing Walker 256 (W256) rats is a characteristic symptoms observed during cancer progression. Previous results showed two opposite activities in the total blood of tumor bearers. One of them decreases and another increases the osmotic fragility (OF) of rat red blood cells (RBC). The decrease of RBC osmotic fragility was obtained when rats were inoculated with A variant (aggressive) of W256 and the opposite effect when AR variant (regressive) was used. The aim of this work was to confirm these data and, if possible, to isolate the plasmatic components responsible by changes in RBC osmotic fragility of the tumor bearers. Eight-week-old male Wistar rats were submitted to multifocal model of tumor growth (4 subcutaneous simultaneous inoculations with 5x1 06 A or AR cells/site) used to simulate cancer terminal metastatic dissemination stage. Ali animals were splenectomized and inoculated at zero day. Total blood samples from A or AR tumor-bearing rats were collected at 0,4 and 10 days post-splenectomy and inoculations. Plasma aliquots were partitioning with ammonium sulfate. Herewith was obtained supernatant 60% (S60), precipitated 60% (P60) and precipitated 60-80% (P60-80) fractions. The OF was determined at O, 4 and 10 days in total blood of tumor bearers or using RBC from normal donor rat incubated, at 37°C during 30, 120 and 240 minutes, with total plasma or fractions. Finally, total plasma and fractions were submitted to the SDS-PAGE for identification of probable protein components responsible by RBC osmotic fragility alterations. All comparison was make against total plasma and fractions of control rats. Thus, was observed that used model is very adequate to simulate metastatic phase of cancer. O aumento da FO das hemácias não estava associado com o desenvolvimento da anemia produzido por ambas as variantes celulares do W256. Visto que, na fase grave da doença (10 dias), quando a anemia nos portadores da variante A (5,2± 0,4 gHb/dL) foi maior do que a dos portadores da variante AR (6,7± 0,8 gHb/dL) não foi observado aumento na FO de hemácias de ratos portadores da variante A do W256. The increase of red blood cells OF was not associated with anemia developed produced by both W256 variant cells. Thus, in grave phase of disease (10 days), when anemia in tumor-bearing A (5.2± 0.4 gHb/dL) rats was higher than observed on that AR cells bearers (6.7± 0.8 gHb/dL), none OF increase in RBC of A rats was observed. Ammonium sulfate partitioning showed two protein components capable to induced OF significant increase (P<0.05) on rat normal RBCs. The first, observed in both W256 variants, precipitated at 60% of saturation, present in initial phase of tumoral growth (4 days) and the second precipitated at 80%, emerged to Iate (10 days) only in AR bearing-rats. Moreover, in the plasma these animals also was observed OF increase associated with P60% (high molecular mass) and S60% and P60-80% (Iow molecular mass) fractions. This characteristic can to reflect the tumor/host interaction and the regressive behavior of AR W256 variant. Plasma total and fractions SDS-PAGE analysis allowed the identification of two protein bands (Mr =66 and > 116). The increase of these bands in both W256-bearers as well its temporal alterations, objected the establishment of the correlation between rat RBC osmotic fragility and experimental cancer
Subject: Anemia
Neoplasias - Diagnóstico
Precipitação
Eletroforese
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2001
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

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