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dc.contributor.CRUESPUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASpt_BR
dc.contributor.otherMarangoni, Sérgio, 1951-pt_BR
dc.descriptionOrientadores: Sergio Marangoni, Luis Alberto Ponce Sotopt_BR
dc.descriptionTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologiapt_BR
dc.format.extent85 f. : il.pt_BR
dc.format.mimetypeapplication/pdfpt_BR
dc.languagePortuguêspt_BR
dc.typeTESEpt_BR
dc.titleEstudos comparativos da atividade cinética e trombina-símile de serinoproteases isoladas a partir dos venenos de Bothrops brazili e Bothrops roedingeript_BR
dc.title.alternativeComparative studies of the kinetics and thrombin-like activity of serine proteases isolated from the venom of Bothrops brazili and Bothrops roedingeript_BR
dc.contributor.authorVilca Quispe, Augusto, 1970-pt_BR
dc.contributor.coadvisorPonce-Soto, Luis Albertopt_BR
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologiapt_BR
dc.contributor.nameofprogramPrograma de Pós-Graduação em Biologia Funcional e Molecularpt_BR
dc.subjectSerinoproteasespt_BR
dc.subjectBothrops roedingeript_BR
dc.subjectBothrops brazilipt_BR
dc.subjectCromatografia líquida de alta eficiênciapt_BR
dc.subjectEnzima trombina "like"pt_BR
dc.subjectVeneno - Purificaçãopt_BR
dc.subject.otherlanguageSerine proteasesen
dc.subject.otherlanguageBothrops roedingerien
dc.subject.otherlanguageBothrops brazilien
dc.subject.otherlanguageHPLC (Chromatography)en
dc.subject.otherlanguageThrombin-like enzymeen
dc.description.abstractResumo: No presente trabalho duas novas serinoproteases com atividade trombina-simile, nomeadas TLBbz e TLBro isoladas a partir de Bothrops brazili e Bothrops roedingeri respectivamente, foram purificadas em um único passo cromatográfico por HPLC de fase reversa com um alto grau de pureza e homogeneidade molecular, sem perda da atividade biológica. Ambas serinoproteases foram caracterizadas fisico-quimicamente, revelando uma massa molecular relativa de TLBbz = 35,13 KDa e TLBro = 20,24 KDa por SDS-PAGE. Ambas apresentaram atividade proteolítica perante o substrato cromogenico DL-Ba?NA. Os estudos da atividade cinética mostraram que as serinoproteases tiveram um comportamento michaeliano frente ao substrato DL-Ba?NA, apresentando uma Vmax = 1,89 nmoles ?-NA/Lt/min e KM = 0,853 mM para TLBbz; e Vmax = 0,0432 nmoles ?-NA/Lt/min e KM = 0,039 mM para TLBro. Ambas serinoproteases apresentam uma atividade ótima em torno de 38 oC e pH 8,0; sendo inibidas pela ação do fluoreto de fenilmetilsulfonila (PMSF) e outros inibidores, através dos quais a atividade trombina-simile foi reduzida em mais dos 50 % (TLBbz = 86.2 % and TLBro = 42.6 %). Ambas TLBbz e TLBro possuem caráter acido ao apresentar um elevado numero de aminoácidos ácidos, assim como uma boa quantidade em numero de aminoácidos hidrofóbicos, o que garante a estabilidade conformacional da proteína. A presença de 12 cisteinas sugere a possível formação de 6 pontes dissulfeto. TLBbz e TLBro evidenciaram uma atividade fibrinogenolitica frente ao fibrinogenio bovino hidrolisando a cadeia alfa (?) e beta (?), comportando-se como uma trombina-simile tipo AB no caso da TLBro e tipo B, por hidrolizar a cadeia beta (?), no caso da TLBbz. Finalmente, estudos da atividade biológica indicam a propriedade de induzir agregação plaquetaria e esse efeito e inibido pela presença de PMSFpt
dc.description.abstractAbstract: In this work, two new serine proteases with thrombin-like activity called TLBbz and TLBro from Bothrops brazili and Bothrops roedingeri respectively were purified in a single chromatographic step by reverse phase HPLC with a high degree of purity and molecular homogeneity without loss of biological activity. Both serine proteases have been characterized physico-chemically, showing a relative molecular mass of TLBbz = 35.13 and TLBro = 20.24 kDa by SDS-PAGE. On the other hand, showed a proteolytic activity towards the chromogenic substrate DL-Ba?NA. The studies of the kinetic activity showed that serine proteases have a michaelian behavior when tested with the substrate DL-Ba?NA, with a Vmax = 1.89 nmoles ?- NA/Lt/min and KM = 0.853 mM for TLBbz, and Vmax = 0.0432 nmoles ?-NA/Lt/min and KM = 0.039 mM for TLBro. Both serine proteases have an optimal activity around 38 °C and pH 8,0; and were inhibited by the action of phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and other inhibitors, whereby the thrombin-like activity was reduced in more than 50 % (TLBbz = 86.2 % and TLBro = 42.6 %). Both TLBbz and TLBro have acidic character by presenting a large number of aminoacids acids and a good amount of hydrophobic amino acids, which ensures the conformational stability of the protein. The presence of 12 cysteines suggests the possible formation of six disulfide bridges. TLBbz and TLBro showed a fibrinogenolytic activity against the bovine fibrinogen and hidrolise alpha (?) and beta (?) chain, behaving as a thrombin-like AB types in the case of TLBro and hydrolyzing the beta chain (?) behaving as a thrombin-like B types in the case of TLBbz. Finally, studies of biological activity indicate the ability to induce platelet aggregation and this effect is inhibited by the presence of PMSFen
dc.publisher[s.n.]pt_BR
dc.date.issued2013pt_BR
dc.identifier.citationVILCA QUISPE, Augusto. Estudos comparativos da atividade cinética e trombina-símile de serinoproteases isoladas a partir dos venenos de Bothrops brazili e Bothrops roedingeri. 2013. 85 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/314680>. Acesso em: 22 ago. 2018.pt_BR
dc.description.degreelevelDoutoradopt_BR
dc.description.degreedisciplineBioquimicapt_BR
dc.description.degreenameDoutor em Biologia Funcional e Molecularpt_BR
dc.contributor.committeepersonalnameNovello, Jose Camillopt_BR
dc.contributor.committeepersonalnameRocha, Thalitapt_BR
dc.contributor.committeepersonalnameGalvão, Ana Carolina Santos de Souzapt_BR
dc.contributor.committeepersonalnameCavalcante, Walter Luís Garridopt_BR
dc.date.available2018-08-22T22:19:51Z-
dc.date.accessioned2018-08-22T22:19:51Z-
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2018-08-22T22:19:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VilcaQuispe_Augusto_D.pdf: 3256672 bytes, checksum: 5fbbaf997230230025e7a3945d3d9410 (MD5) Previous issue date: 2013en
dc.identifier.urihttp://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/314680-
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