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Type: TESE
Title: Isolamento e caracterização de uma lectina de sementes de Annona coriacea e seu efeito sobre os insetos Callosobruchus maculatus e Anagasta kuehniella
Author: Coelho, Mirela Batista
Advisor: Macedo, Maria Lígia Rodrigues
Abstract: Resumo: As lectinas são (glico) proteínas de origem não imune que interagem especifica e reversivelmente com carboidratos. O atual interesse em lectinas deve-se a sua utilidade como ferramenta em pesquisas biológica e médica, assim como o seu envolvimento na defesa de plantas contra fungos e insetos. Neste trabalho, uma lectina foi purificada de sementes de Annona coriacea (Annonaceae), conhecida comumente por Marolo, usando gel filtração em coluna Sephadex G-75 e em coluna de fase reversa C18 _-Bondapack. Em SDS-PAGE, ACLEC (A. f.oriacea lectin) migrou como duas bandas com massa molecular aparente de 21,6 e 16,0 kDa em condições não reduzidas, e 16,0 e 11,4 kDa em presença de ditiotreitol 1 M. Portanto, a subunidade de 21,6 kDa formada por duas cadeias de 11,0 kDa ligadas covalentemente. A massa molecular relativa de 12 kDa foi estimada por gel de filtração em coluna Superdex 75, indicando que ACLEC comporta-se como um heterodimero. ACLEC aglutinou eritrócito humano (do tipo A, B, AB e O), eritrócitos de bovino, camundongo,carneiro, coelho, caprino, galinha e de rato. A lectina apresentou especificidade a D-manose e D-glicose. Por ensaios fisico-químicos constatamos que ACLEC não foi inibida por ampla faixa de pH, ou afetada por íons divalentes, ou enzimas proteolíticas como pronase. A oxidação com metaperiodato de sódio, ou redução com uréia e ditiotreitol também não afetaram a hemaglutinação. Porém, a hemaglutinação foi inibida por altas temperaturas e por exposição à tripsina e ácido trifluorometanosulfônico. A análise de aminoácidos mostrou uma alta quantidade de resíduos de Arg e Gly, presença de três resíduos de metionina e a ausência de resíduos de fenilalanina. O N-terminal de ACLEC apresentou aproximadamente 50% de homologia com outras lectinas de plantas. ACLEC não agregou plaquetas nem afetou a agregação plaquetária por colágeno ou ristocetina.ACLEC não inibiu o desenvolvimento de fungos e do inseto Callosobruchus maculatus, mas teve alto efeito detrimental sobre o desenvolvimento do inseto Anagasta kuehniella. Estas observações sugerem que esta lectina pode agir seletivamente como um inseticida contra algumas espécies de insetos

Abstract: Lectins are (glyco) proteins with non-immune origin that interact specifically and reversibly with carbohydrates. The current interest in plant lectins reflects their usefulness as tools in biological and medical research and their involvement in plant defense against fungi and insects. In this work, a lectin was purified from the seeds of Annona coriaceae (Annonaceae), commonly known as "Marolo", using gel filtration on Sephadex G-75 and reversed-phase HPLC on a j..l-Bondapack column. In SDS-P AGE, ACLEC (A. ç.oriacea lectin) migrated in two bands with apparent molecular masses of 21.6 kDa and 16.0 kDa in nonreducing conditions, and 16.0 kDa and 11.4 kDa in the presence of 1 M dithiothreitol. Nevertheless, the subunit of 21.6 kDa is formed by two bands covalent-binding of 11.0 kDa. Molecular mass of 12.0 kDa was estimated by gel filtration on Superdex 75, thus indicating that ACLEC exists as a heterodimer. ACLEC agglutinated human type A, B, AB and O erythrocytes, as well as mouse, sheep, rabbit, cow, goat, chicken and rat erythrocytes. The lectin had a higher affinity for D-mannose and D-glucose. The hemagglutinating activity of ACLEC was not inhibited over a wide pH range, or was it afIected by divalent cations or proteolytic enzymes such as pronase. Oxidation with sodium metaperiodate, or reduction with urea and dithiothreitol also did not afIect the hemagglutination. On the other hand, hemagglutination was inhibited at high temperature and by exposure to 1rypsin and trifluoromethanesulfonic acid. Amino acid analysis showed a high content of Arg and Gly, presence of three methionine and the absence of phenylalanine. The N-terminal sequence of ACLEC showed approximately 50% of homology with other plant lectins. ACLEC did not aggregate platelets or afIected platelet aggregation by collagen or ristocetin.ACLEC not inhibited the development of fungi and of the insect Callosobruchus maculatus but it had a high detrimental afIect on the development of the insect Anagasta keuhniella. This observation suggests that this lectin may act selectively as an insecticide against some insect species
Subject: Lectinas
Anagasta
Gorgulho do feijão-de-corda
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2002
Appears in Collections:IB - Dissertação e Tese

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