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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Atividades peptidásicas e antipeptidásicas de peçonhas botrópicas
Title Alternative: Peptidase and antipeptidase activities of Bothrops venoms
Author: Fernandes, Priscila Cordeiro Lima, 1984-
Advisor: Hyslop, Stephen, 1964-
Abstract: Resumo: Neste trabalho investigamos algumas atividades peptidásicas (aminopeptidase M ¿ APM, dipeptidil peptidase IV ¿ DPP IV e endopeptidase neutra 24.11 ¿ NEP 24.11) em quatro peçonhas do gênero Bothrops (B. alternatus, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni) e avaliamos a influência da fração de baixa massa molecular destas peçonhas sobre a atividade das peptidases. Também estudamos o efeito das quatro peçonhas sobre as atividades das três peptidases em tecido renal de rato in vitro. As quatro peçonhas mostraram atividades APM e DPP IV localizadas nos picos de alta massa molecular do perfil cromatográfico obtido por gel filtração; nenhuma continha NEP 24.11. A remoção da fração de baixa massa molecular (<5 kDa) por filtração centrifugal (filtros Amicon) resultou em queda na atividade da APM em todas as peçonhas, e redução da atividade da DPP IV em duas peçonhas (B. alternatus e B. moojeni); a atividade foi restaurada com a reposição desta fração. A incubação de tecido renal com concentrações crescentes das peçonhas inibiu a APM e NEP 24.11, mas estimulou a atividade DPP IV. Os principais picos das peçonhas obtidos por gel filtração mostraram graus variados de inibição da APM e NEP 24.11, sem efeito na DPP IV exceto aumento de atividade com o pico que continha DPP IV da peçonha. A análise detalhada da ação dos picos da peçonha de B. jararaca sobre a atividade da NEP 24.11 e subsequente cromatografia por troca iônica do pico mais ativo (PVI) levou à identificação de um subpico com potente atividade inibitória sobre esta peptidase. Esta inibição, que não era devido à atividade proteolítica, fosfolipásica A2 ou lectina, foi menos potente que aquela observada com o fosforamidon, inibidor especifico da NEP 24.11. Estes resultados indicam que as peçonhas botrópicas contêm peptidases específicas cuja atividade pode ser modulada por componentes de baixa massa molecular da peçonha. As peçonhas também contêm componentes que inibem a atividade da APM e NEP 24.11 renais. A caracterização parcial de um pico da peçonha de B. jararaca indicou a presença de um inibidor potente da NEP 24.11 renal. A identificação do componente ativo deste pico poderia servir de ponto de partida para o desenvolvimento de nova ferramenta para pesquisa básica e aplicação terapêutica

Abstract: In this work, we investigated some peptidase activities (aminopeptidase M ¿ APM, dipeptidyl peptidase IV ¿ DPP IV and neutral endopeptidase 24.11 ¿ NEP 24.11) in four Bothrops venoms (B. alternatus, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni) and examined the influence of the low molecular mass fraction of these venoms on peptidase activity. We also assessed the effects of the four venoms on the activities of these three peptidases in rat renal tissue in vitro. The four venoms contained APM and DPP IV activities that eluted in the high molecular mass peaks of the gel filtration elution profile; none of the venoms had NEP 24.11 activity. Removal of the low molecular mass fraction (<5 kDa) by centrifugal filtration (Amicon filters) resulted in a decrease in the APM activity of all the venoms and a decrease in DPP IV activity in two venoms (B. alternatus and B. moojeni); activity was fully restored by recombining the fraction with the rest of the corresponding venom. The incubation of renal tissue with increasing venom concentrations inhibited APM and NEP 24.11, but stimulated DPP IV. The main peaks obtained by gel filtration of each venom showed varying degrees of inhibition of APM and NEP 24.11, but with no effect on DPP IV, except for an increase in activity with the peak containing venom DPP IV. Detailed analysis of the action of the gel filtration peaks of B. jararaca venom on NEP 24.11 activity followed by fractionation of the most active peak (PVI) by ion exchange chromatography resulted in the identification of a subpeak with potent inhibitory activity on this peptidase. This inhibition, which was not attributable to protease, phospholipase A2 or lectin activity, was less potent than that observed with phosphoramidon, a specific inhibitor of NEP 24.11. These results indicate that Bothrops venoms contain specific peptidases, the activity of which is modulated by low molecular mass components of the venoms. The venoms also contain components that inhibit renal APM and NEP 24.11. Partial characterization of the active peak from B. jararaca venom indicated the presence of a potent inhibitor of renal NEP 24.11. The identification of the active component of this peak could serve as a starting point for the development of a new tool for basic research and possible therapeutic application
Subject: Peçonhas
Bothrops
Peptídeo hidrolases
Inibidores de proteases
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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