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Type: TESE DIGITAL
Title: Rosuvastatina inibe a adesão e ativação do receptor do fibrinogênio de plaquetas de ratos saudáveis e dislipidêmicos
Title Alternative: Rosuvastatin inhibits adhesion and fibrinogen receptor activation in platelets of healthy and dyslipidemic rats
Author: Goulart, Gisele, 1987-
Advisor: Marcondes, Sisi, 1966-
Paschoal, Sisi Marcondes, 1966-
Abstract: Resumo: A hiperlipidemia é uma condição que favorece a formação de trombos. As estatinas inibem a HMG-CoA redutase, etapa limitante a síntese do colesterol, inibindo assim os níveis de colesterol sérico. Além disso, as estatinas levam a efeitos pleiotrópicos, ou seja, efeitos que independem da redução de colesterol, como a inibição da ativação plaquetária. As plaquetas são importantes para a formação de trombo e a ativação da integrina ?IIb?3 (receptor de fibrinogênio) é fundamental para este processo. No presente trabalho, decidimos investigar o efeito da rosuvastatina na adesão e na ativação da integrina ?IIb?3 e c-Src de plaquetas de ratos tratados com dieta padrão ou hiperlipídica. Também investigamos o papel da PKC e fosfatases na ativação da beta3 e c-Src. O presente trabalho foi aprovado pela Comissão de ética no Uso de Animais da UNICAMP número 3046-1 . Os ratos Wistar machos foram tratados por 16 semanas com dieta normo ou hiperlipídica. Na última semana da dieta, os ratos foram tratados com salina ou rosuvastatina (10mg/kg, por gavagem, 1 vez ao dia). Para os experimentos in vitro, as plaquetas dos ratos tratados com as duas diferentes dietas foram incubadas com rosuvastatina (5 ?M, 15 min). Foram realizados experimentos de adesão plaquetária ao fibrinogênio e ensaios de Western Blotting para determinação da fosforilação da Tyr 773 ou 785 da beta3, bem como da fosforilação da Tyr 416 da c-Src plaquetária. Em alguns experimentos, as plaquetas foram incubadas com os inibidores inespecíficos de PKC (GF109203X) e fosfatases (ortovanadato) por 5 min após a pré-incubação com rosuvastatina. O tratamento de ratos com a rosuvastatina reduziu significativamente a adesão de plaquetas não estimuladas ou estimuladas com ADP ou trombina nos grupos dieta padrão ou hiperlipídica. Da mesma forma, a incubação de plaquetas, dos dois grupos experimentais, com rosuvastatina inibiu a adesão plaquetária, a qual foi acompanhada pela redução da fosforilação da beta3 (resíduos de Tyr 773 e 783) e c-Src (Tyr 416). A incubação das plaquetas com o GF109203X inibiu a fosforilação da beta 3, mas não modificou a fosforilação da c-Src. Entretanto, a incubação das plaquetas com rosuvastatina e o inibidor da PKC reduziu significativamente a fosforilação da c-Src (redução de 26% e 46% em plaquetas de ratos tratados com dieta padrão ou hiperlipídica, respectivamente). Por outro lado, o ortovanadato reduziu significativamente a ativação da beta 3 e da c-Src, seja no grupo dieta padrão ou hiperlipídica. Portanto, concluímos que a rosuvastatina reduz a adesão de plaquetas de ratos tratados com dieta padrão ou hiperlipídica, por mecanismos envolvendo a inibição da ativação da c-Src e do receptor de fibrinogênio. Além disso, também mostramos que a PKC e fosfatases modulam a fosforilação da beta3 em plaquetas de ratos tratados com dieta padrão ou hiperliídica

Abstract: Hyperlipidemia is a condition that favors thrombus formation. Statins inhibit HMG-CoA reductase, the rate-limiting step in cholesterol synthesis, thus inhibiting serum cholesterol levels. Besides, statins cause pleiotropic effects which are independent of cholesterol levels reduction. One such effect is inhibition of platelet activation. Platelets are important to thrombus formation and activation of integrin ?IIb?3 (fibrinogen receptor) is crucial to this process. In the present work, we decided to investigate the effect of rosuvastatin on adhesion and activation of integrin ?IIb?3 and c-Src in platelets of rats treated with standard or high fat diet. We also investigated the role of PKC and phosphatases on the beta3 and c-Src activation. This study was approved by the Ethics Committee on Animal Use of UNICAMP number 3046-1. Male Wistar rats were fed for 16 weeks with standard or high fat diet. In the last week of the diet, the rats were treated with saline or rosuvastatin (10mg/kg by gavage, once a day). For in vitro experiments, platelets from mice treated with the two different diets were incubated with rosuvastatin (5 ?M, 15 min). Platelet adhesion to fibrinogen experiments were performed and Western blotting assays for determining the phosphorylation in platelets of Tyr 773 or 785 of beta3, as well as the phosphorylation of Tyr 416 of c-Src were carried out. In some experiments, platelets were incubated with non-specific PKC inhibitors (GF109203X) and phosphatases (orthovanadate) for 5 min after pre-incubation with rosuvastatin. Treatment of rats with rosuvastatin significantly reduced unstimulated and ADP or thrombin-stimulated platelet adhesion of standard or high-fat diet groups. Similarly, incubation of platelets, from the standard or high-fat diet groups , with rosuvastatin inhibited platelet adhesion, which was accompanied by reduced phosphorylation of beta3 (Tyr residues 773 and 783) and c-Src (Tyr 416). Incubation of the platelets with GF109203X inhibited phosphorylation of beta-3, but did not change the phosphorylation of c-Src. However, incubation of the platelets with the PKC inhibitor and rosuvastatin significantly reduced the phosphorylation of c-Src (reduction of 26% and 46% in platelets of standard or high fat diet rats, respectively). On the other hand, the orthovanadate significantly reduced the activation of beta-3 and c-Src, either in standard or high-fat diet group. Therefore, we conclude that rosuvastatin reduces platelet adhesion of rats treated with standard or high-fat diet by mechanisms involving inhibition of c-Src and fibrinogen receptor activation. Moreover, we also show that PKC and phosphatases modulate the phosphorylation of beta3 in platelets of rats treated with standard or high-fat diet
Subject: Plaquetas (Sangue)
Rosuvastatina cálcica
Dislipidemias
Complexo glicoproteico GPIIb-IIIa de plaquetas
Inibidores de hidroximetilglutaril-CoA redutases
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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