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Type: DISSERTAÇÃO DIGITAL
Degree Level: Mestrado
Title: Linfócitos inibem a agregação plaquetária por mecanismos dependentes de óxido nítrico
Title Alternative: Lymphocytes inhibit platelet aggregation by mechanisms dependent of nitric oxid
Author: Cardelli, Nadia Jaqueline Almeida, 1986-
Advisor: Marcondes, Sisi, 1966-
Paschoal, Sisi Marcondes, 1966-
Abstract: Resumo: Hoje, as plaquetas são consideradas importantes células na inflamação. A reatividade plaquetária pode ser modulada por células inflamatórias clássicas, diretamente pelo contato célula/célula ou, indiretamente através da liberação de mediadores inflamatórios. A liberação destes mediadores inflamatórios é, geralmente, potencializada pelo lipopolissacarídeo (LPS). Apesar de serem células importantes em diferentes condições patológicas como a sepse e aterosclerose, a interação entre plaquetas e linfócitos é pouco estudada. Portanto, neste trabalho decidimos investigar o efeito de linfócitos na agregação plaquetária na ausência ou presença de LPS. O sangue arterial de ratos foi centrifugado para obtenção dos linfócitos (pureza de 99%) e o sangue restante foi centrifugado novamente para obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP). As plaquetas (1,2 x 108 plaquetas/mL) foram incubadas com os linfócitos (5 x 106 células/mL) na ausência ou presença de LPS, do inibidor não seletivo da óxido nítrico sintase (L-NAME), do inibidor da óxido nítrico induzível (1400W), do inibidor da guanilil ciclase (ODQ) ou do sequestrador de peroxinitrito -(-) epigallocatechin gallate (ECG). Após 6h, a suspensão celular foi centrifugada para a remoção dos linfócitos e as plaquetas foram ativadas com ADP (5 µM). Os linfócitos reduziram em cerca de 51% a agregação plaquetária, a qual foi significativamente prevenida pelos inibidores da óxido nítrico sintase (NOS) L-NAME e 1400W e pelo ODQ. A inibição da agregação pelos linfócitos foi acompanhada de um aumento de 2 vezes dos níveis intraplaquetários de GMPc, o qual foi abolido pelo ODQ. Os linfócitos co-incubados com as plaquetas na presença de LPS inibiu significativamente a agregação e elevou os níveis intraplaquetários de GMPc. O efeito inibitório dos linfócitos na agregação na presença de LPS foi prevenido pelo L-NAME e 1400W, mas não foi afetado pelo ODQ, apesar deste ter reduzido para níveis basais o GMPc intraplaquetário. O ECG aboliu a inibição da agregação por linfócitos na presença de LPS. O sequestrador de peroxinitrito não modificou a inibição da agregação pelos linfócitos na ausência do LPS. Nossos resultados mostram que os linfócitos inibem a agregação plaquetária via liberação de NO, principalmente proveniente da atividade da iNOS. Na ausência de LPS, os mecanismos são dependentes de GMPc, enquanto na presença de LPS, o peroxinitrito parece ser o principal mediador do efeito inibitório dos linfócitos na agregação

Abstract: Currently, platelets are considered important cells in inflammation. Platelet reactivity may be modulated by classical inflammatory cells, directly by cell/cell contact or, indirectly through inflammatory mediators release which, in general, enhanced by lipopolysaccharide (LPS). Besides the important role in pathological conditions such as sepsis and atherosclerosis, the interaction between platelets and lymphocytes is rarely studied. Therefore, in this work we decided to investigate the effect of lymphocytes on platelet aggregation in LPS-stimulated and non-stimulated cells. Rat arterial blood was centrifuged to obtain lymphocytes (99% purity) and the remaining blood was centrifuged again to yield platelet-rich plasma (PRP). Platelets (1.2 x 108 platelets/mL) were incubated with lymphocytes (5 x 106 cells/mL) in the presence or absence of either; LPS (100 µg/ml), or the non-selective and the inducible nitric oxide synthase (NOS) inhibitors L-NAME and 1400W, respectively, or the guanylyil cyclase inhibitor ODQ or the peroxynitrite scavenger -(-)epigallocatechin gallate (ECG). After 6h, the cellular suspension was centrifuged to remove the lymphocytes and then, ADP (5 µM)-induced platelet aggregation was carried out. Lymphocytes inhibited the platelet aggregation by 51%, which was significantly prevented by L-NAME (300 µM) or 1400W (100 µM), as well as by ODQ (10 µM). The platelet inhibition by lymphocytes was accompanied by 2-fold increases of intraplatelet cGMP levels that were reversed by ODQ. Next, co-incubation of lymphocytes with platelets in presence of LPS (100 µg/mL) significantly inhibited aggregation and elevated the cGMP levels (2.2-fold increase). This inhibitory effect was prevented by L-NAME and 1400W, but rather unaffected by ODQ, although the intrapelet cGMP levels were reduced. ECG (100 µM) abolished the inhibition by lymphocytes on platelet aggregation in LPS-treated cells, but not in non-treated cells. Our results show that lymphocytes inhibits platelet aggregation via iNOS-derived NO release. In absence of LPS, the cGMP pathway mostly mediates the platelet inhibition, whereas in presence of LPS, peroxynitrite production accounts for the platelet inhibition
Subject: Agregação plaquetária
Linfócitos
Lipopolissacarideos
Óxido nítrico sintase tipo II
Ácido peroxinitroso
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2016
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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