Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/313060
Type: DISSERTAÇÃO
Degree Level: Mestrado
Title: Caracterização e propriedades biofísicas da proteína SIVA1
Title Alternative: Characterization and biophysical properties of the SIVA1 protein
Author: Dantas, Larissa Elizabeth Cordeiro, 1987-
Advisor: Saad, Sara Teresinha Olalla, 1956-
Abstract: Resumo: A sinalização celular é o mecanismo que as células possuem para se comunicar com suas vizinhas, tecidos distantes ou mesmo em processos internos. Portanto, entender como a sinalização está organizada em uma célula sadia é de extrema importância para o entendimento de processos vitais normais. Desta forma, ter suporte para avaliar as bases moleculares das doenças, uma vez que muitas delas originam-se de disfunções na transmissão de sinais celulares. A proteína SIVA1, superexpressa em neoplasias de células do sangue, interage com a proteína p53, com membros da superfamília dos receptores de necrose tumoral, estatimina, dentre outros. Estas proteínas estão relacionadas com diversas vias de sinalização em câncer e, portanto, SIVA1 faz-se um forte candidato para estudos de desenho racional de novos fármacos. O objetivo deste estudo foi caracterizar as propriedades biofísicas do domínio C-terminal de SIVA1 a fim de contribuir futuramente com o descobrimento de novos alvos para drogas alvo-dirigidas. O domínio C-Terminal (resíduos de 84 a 175), fusionados à Glutationa-S-Transferase (GST) e expressos em um sistema de expressão heteróloga de E.coli, produziu um recombinante GST-SIVA-C-Terminal, que foi em seguida purificado por colunas de afinidade a proteínas fusionada à GST (GSH sefarose) e por filtração em fel. A capacidade biológica de ligar-se a outras proteínas, das famílias supramencionadas, foi testada em extrato de células da linhagem Jurkat. Ensaios bioquímicos e biofísicos mostraram que a proteína apresentava-se monodispersa em solução com um formato predominante não enovelado e alongado. No entanto, em altas concentrações, a proteína apresenta tendência de formar agregados solúveis. Espera-se que estes resultados possam levar a um melhor entendimento das propriedades de SIVA1, possibilitando o desenho de compostos químicos alvo-específicos. As coletas de dados para o estudo foram feitas no Laboratório de Bioquímica de Proteínas do Instituto de Química (IQ-Unicamp), no Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS) e no Laboratório Nacional de Biociências (LNBio-LEC)

Abstract: Siva1 protein interacts with tumor protein p53 and with the member of the tumor necrosis factor receptor superfamily, stathmin, among others. These proteins are related to several pathways involved in cancer and are therefore, strong targets for drug design. Thus, the aim of this study was to characterize the biophysical properties of Siva 1 C-terminal domain in order to contribute to the discovery of new target directed drugs. The C-terminus Siva1 domain (residues 84-175) was fused to gluthatione S-transferase (GST) and expressed in an E coli system and the recombinant GST-Siva C-terminus was purified using GST-Tagged Protein affinity and gel filtration chromatography. We tested the biological activity of the purified Siva C-terminus domain in an extract of the Jurkat cell line that contained natural SIVA binders. Biophysical and biochemical assays showed that the protein was monodisperse in solution with a predominant unfolded and elongated shape. However, at high concentrations, the protein showed a tendency to form soluble aggregates. These results are expected to lead to further progress in better understanding of SIVA1 properties and target-directed drug design. Experiments took place at "Laboratório de Bioquímica de Proteínas" at Institute of Chemistry (IQ-Unicamp), "Laboratório Nacional de Luz Síncrotron" (LNLS) and "Laboratório Nacional de Biociências" (LNBio-LEC)
Subject: Proteinas - Isolamento e purificação
Leucemia
Bioquímica
Proteína SIVA1 humana
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

Files in This Item:
File SizeFormat 
Dantas_LarissaElizabethCordeiro_M.pdf37.23 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.