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Type: TESE
Title: Aplicação da biofotônica para o estudo de cicatrizes
Title Alternative: Application of biophotonics to the study of scar tissue
Author: Ferro, Daniela Peixoto, 1981-
Advisor: Metze, Konradin, 1956-
Abstract: Resumo: A aplicação integrada de técnicas modernas, como a Geração do Segundo Harmônico (SHG) e os tempos de vida da fluorescência (FLIM), com análise de imagens matemáticas nos permitem visualizar detalhes não vistos por microscopia de luz convencional. O objetivo deste estudo foi investigar se isto também pode ser aplicado para a investigação de tecido cicatricial. Foram estudados 28 casos de preparações histológicas de rotina, de quelóides, cicatrizes hipertróficas e normais. A Fluorescência de dois fótons e SHG foram obtidas por um microscópio multifóton (LSM 780 NLO-Zeiss), em objetiva de 40X e excitados por um laser Mai Tai de Ti: Safira (comprimento de onda de 940 nm). Foram adquiridas imagens em 3D e foram criadas imagens justapostas a fim de comparar diferentes cicatrizes ou várias regiões no interior da mesma cicatriz com análise de imagens informatizadas. Variáveis de Textura derivadas a partir da matriz de coocorrência das imagens de fluorescência mostraram diferenças significativas entre as cicatrizes normais, cicatrizes hipertróficas e quelóides. Para a análise do FLIM, foi utilizado um sistema composto por um microscópio confocal (LSM780-NLO- Zeiss), com objetiva de 40x e um sistema FLIM acoplado. As amostras foram excitadas por um laser de diodo a 405nm. Estudamos secções não coradas de 32 casos processados rotineiramente de tecido cicatricial incluídos em parafina. As áreas das regiões centrais e periféricas foram selecionadas aleatoriamente e comparadas. Os tempos de vida de fluorescência das hemácias serviram como padrão interno. Os tempos de vida do colágeno em áreas centrais em todos os tipos de cicatrizes foram significativamente mais longo do que em áreas periféricas. Houve correlação positiva entre os tempos de vida de fluorescência das hemácias e as fibras de colágeno entre os casos. Em resumo, o SHG e a técnica Flim revelam em cicatrizes rotineiramente processadas, características morfológicas dos tecidos, que não podem ser detectadas por microscopia de luz convencional

Abstract: The integrated application of modern techniques such as Second Harmonic Generation (SHG) and fluorescence lifetime imaging (FLIM) with mathematical image analysis enable us to visualize details not seen by conventional light microscopy. The aim of this study was to investigate whether this could also be true for the investigation of scar tissue. 28 routine histological preparations of keloids, hypertrophic and normal scars were studied. Two-photon fluorescence and SHG was obtained by a multiphoton microscope (LSM 780 NLO-Zeiss (at 40X objective magnification) and a Mai Tai Ti: Sapphire laser with excitation at 940 nm wavelength. 3D reconstructed patchwork images were created in order to compare different scars or various regions inside the same scar with computerized image analysis. Texture variables derived from the co- occurrence matrix of the fluorescence images showed significant differences between normal scars, hypertrophic scars and keloids. For FLIM analysis we used a system composed of a confocal microscope Zeiss LSM780 Upright-NLO with the 40x objective and a FLIM detection system. The samples were excited by a laser diode at 405nm. We studied unstained sections of 32 routinely processed and paraffin-embedded cases of scar tissue. Randomly selected areas of the central and peripheral regions were compared. The fluorescence lifetimes of red blood cells served as internal standard. Lifetimes of collagen in central areas of all scar types were significantly longer than in the periphery. There was a significant positive correlation between the fluorescence lifetimes of red blood cells and collagen fibers among the cases. In summary, SHG and FLIM techniques reveal in routinely processed scar tissue morphological characteristics, which cannot be detected by conventional light microscopy
Subject: Queloide
Microscopia confocal
Colágeno
Fluorescência
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FCM - Dissertação e Tese

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