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Type: TESE
Title: Avaliação da proteção e tratamento das alças intestinais fetais utilizando hidrogel (biomaterial) e S-nitrosoglutationa (GSNO) no modelo experimental de gastrosquise
Title Alternative: Evaluation of protection and treatment of fetal bowel using hydrogel (biomaterial) and S-nitrosoglutathione (GSNO) in the experimental model of gastroschisis
Author: Gonçalves, Frances Lilian Lanhellas, 1979-
Advisor: Sbragia Neto, Lourenço, 1962-
Neto, Lourenço Sbragia
Abstract: Resumo: Gastrosquise é um defeito congênito da parede abdominal anterior no qual as alças intestinais ficam herniadas e em contato com o líquido amniótico (LA) cuja exposição crônica resulta em várias disfunções intestinais no período pós-natal. Para reduzir o efeito danoso desta exposição utilizou-se em modelo animal, dosagens diferentes de S-nitrosoglutationa (GSNO), doador de óxido nítrico (NO) e para a concentração mais diluída acrescentou-se o hidrogel de N-isopropilacrilamida (NIPAAm) copolimerizado com ácido acrílico (Aac) para cobrir as alças fetais expostas fetais afim de avaliar o tratamento com NO e a proteção oferecida pelo biomaterial. A gastrosquise foi induzida cirurgicamente em fetos de ratas com 18,5 dias de gestação. Os fetos foram separados em dez grupos: controle externo (CE), gastrosquise (G), controle interno (CI), Sham (S), gastrosquise + adesivo de fibrina - Beriplast® (GA), gastrosquise + adesivo de fibrina + hidrogel seco (GAH), gastrosquise + GSNO a 50 µM (GNO1), gastrosquise + GSNO a 5 µM (GNO2), gastrosquise + GSNO a 0,5 µM (GNO3), gastrosquise + GSNO a 0,05 µM (GNO4), gastrosquise + adesivo de fibrina + hidrogel seco + GSNO a 0,05 µM (GAHNO4). Com 21,5 dias de gestação, os fetos foram colhidos por cesárea e o hidrogel foi cuidadosamente removido. Ao grupo GNO1 não foi dada continuidade, pois a dosagem foi nociva aos animais. Dados de peso corporal e intestinal foram aferidos e algumas amostras do intestino foram fixadas para estudo histométrico e imunoistoquímico e outras congeladas para western blotting e quimioluminescência. Resultados das medidas morfológicas e histométricas, como peso, diâmetro, espessura das camadas e da parede intestinal, demostraram que o grau de proteção e tratamento das alças intestinais foi eficaz nos grupos GAH e GAHNO4, pois apresentaram valores significamente menores, assim como os grupos CE e CI e diferente dos grupos G, GA, GNO2, GNO3 e GNO4 que indicaram processo inflamatório. A expressão das enzimas nNOS, iNOS e eNOS por meio de western blotting e imunoistoquímica dimunuiu principalmente nos grupos GAH, GNO4 e GAHNO4 ficando iguais aos grupos CE e CI. A quantificação de nitrato e nitrito (NOx) no intestino e no LA por quimioluminescência nos grupos G, CI e S, mostrou que o NO se difunde do tecido intestinal para o LA, no grupo G e isso pode ser a causa para o aumento da expressão da enzima NOS. Sendo assim, a aplicação do hidrogel aderido pelo adesivo de fibrina mostrou servir como uma efetiva proteção das alças herniadas e o tratamento concomitante com GSNO a 0,05 ?M também ajudou na redução significante da inflamação na gastrosquise

Abstract: Gastroschisis is a congenital defect of the anterior abdominal wall in which the herniated bowel is in contact with the amniotic fluid (LA) whose chronic exposure results in several postnatal bowel dysfunction. To reduce the harmful effect of this exposure it was used in an animal model, different doses of S-nitrosoglutathione (GSNO), donor of nitric oxide (NO) and the more dilute concentration was added to the hydrogel of N-isopropylacrylamide (NIPAAm) copolymerized acrylic acid (Aac) to cover the exposed fetal handles in order to assess fetal treatment with NO and the protection offered by the biomaterial. Gastroschisis was surgically induced in fetuses of female Sprague-Dawley rats at 18.5 days of gestation. The fetuses were separated into ten groups: external control (CE), gastroschisis (G) internal control (CI), Sham (S), gastroschisis + fibrin adhesive - Beriplast® (GA), gastroschisis + fibrin adhesive + dry hydrogel (GAH), gastroschisis + 50 µM GSNO (GNO1), gastroschisis + 5 µM GSNO (GNO2), gastroschisis + 0.5 µM GSNO (GNO3), gastroschisis + 0.05 µM GSNO (GNO4), gastroschisis + fibrin adhesive + dry hydrogel + to 0.05 ?M GSNO (GAHNO4). On day 21.5 of gestation, fetuses were collected by cesarean section and the hydrogel was carefully removed. The group GNO1 was not given continuity, because the dosage was harmful to the animals. Data of body weight and intestinal samples were measured and some intestinal samples were fixed for immunohistochemical and histometric study and the others were frozen for western blotting and chemiluminescence. Results of morphological and histometric measures such as weight, diameter and thickness of the intestinal wall, showed that the degree of protection and treatment of bowel was effective in groups GAH and GAHNO4 because they showed significantly lower values, as well as groups CE and CI and different from groups G, GA, GNO2, GNO3 and GNO4 that indicated inflammatory process. The expression of nNO, iNOS and eNOS enzymes by western blotting and immunohistochemistry decreased especially in groups GAH, GNO4 and GAHNO4, getting the same results as the CE and CI groups. Quantification of nitrate and nitrite (NOx) by chemiluminescence in the bowel and LA of groups G, S and CI showed that NO diffused from the intestinal tissue to LA in the group G and this may be the cause for the increased expression of the NOS enzymes. Therefore, the application of hydrogel joined by fibrin adhesive showed an effective protection of the herniated bowel and concomitant treatment with GSNO at 0.05 ?M, also helped in significant reduction in inflammation in gastroschisis
Subject: Gastrosquise
Feto - Anomalias
Inflamação
Materiais biocompativeis
Doadores de óxido
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2011
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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