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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Pesquisa do Helicobacter pylori em amostras de fígado não tumoral fixado e emblocado de pacientes com carcinoma hepatocelular = Detection of Helicobacter pylori in formalin-fixed paraffin-embedded non tumoral liver samples from patients with hepatocellular carcinoma
Title Alternative: Detection of Helicobacter pylori in formalin-fixed paraffin-embedded non tumoral liver samples from patients with hepatocellular carcinoma
Author: Gonçalves, Elizabeth Maria Afonso Rabelo, 1977-
Advisor: Almeida, Jazon Romilson de Souza, 1957-
Abstract: Resumo: Diversos estudos têm demonstrado que a infecção crônica pelo Helicobacter (H.) pylori está associada a várias manifestações extragástricas incluindo doença cardíaca isquêmica, doenças neurodegenerativas, metabólicas e autoimunes, doenças de pele e também doenças pancreáticas, colorretais e hepatobiliares. De fato, o H. pylori foi detectado em amostras de bile e tecidos da vesícula e fígado de pacientes com colecistite crônica, colangite esclerosante, hepatite crônica, cirrose e carcinoma hepatocelular (CHC). Sendo assim, pesquisas verificando o papel do H. pylori na etiopatogenia das doenças hepatobiliares são fundamentais para sua melhor compreensão. Os tecidos parafinados representam uma fonte extraordinária para os estudos retrospectivos onde é possível correlacionar os achados moleculares com a terapêutica e a evolução clínica das doenças. Deste modo, o presente estudo teve como principal objetivo verificar a presença do H. pylori em amostras de tecido hepático fixado e emblocado de pacientes com CHC. Foram empregadas 86 amostras divididas em dois grupos. O grupo GA apresentou 57 fragmentos hepáticos de pacientes com cirrose e CHC. O grupo GB foi composto por 29 amostras de fígado de indivíduos sem doença hepática (grupo controle). O DNA foi extraído pelo método do fenol clorofórmio em todas as amostras e, posteriormente, foi realizada a amplificação do gene 16S rRNA do H. pylori. Amostras positivas para o gene 16S rRNA foram submetidas ao sequenciamento de DNA. A coloração imunohistoquímica e a técnica de microdissecção e captura a laser foram realizadas em algumas amostras para confirmação diagnóstica do H. pylori. O estudo da morfologia bacteriana foi realizado pela microscopia de transmissão eletrônica. Os resultados da amplificação do gene 16S rRNA revelaram que 28 amostras (49,1%) foram positivas no GA e 8 amostras (27,6%) amplificaram o gene no GB (p=0.056). No grupo GA não foi verificada relação da positividade do H. pylori com os diferentes fatores de risco para o CHC: infecção pelo vírus da hepatite tipo B (p=1.00) e tipo C (p=0.93), consumo de álcool (p=0.14), hemocromatose (p=1.00), deficiência de alfa-1-antitripsina e nos pacientes cuja etiologia da doença hepática foi criptogênica (p=0.61). No mesmo grupo, não foram observadas diferenças significantes com relação à presença da bactéria e os dados do escore Chil-Pugh e MELD (p=0.29 e p=0.31, respectivamente). Através do sequenciamento, verificou-se que a sequencia do gene 16S rRNA apresentou 98% de similaridade com o DNA do H. pylori. A coloração imunohistoquímica confirmou a presença do H. pylori no fígado. Tanto na microdissecção e captura a laser quanto na microscopia eletrônica de transmissão, foram observados microrganismos semelhantes ao H. pylori, nos espaços sinusóides e, sobretudo, na forma cocóide. Os resultados do presente estudo demonstram que o H. pylori foi detectado em amostras parafinadas de fígado nos pacientes com cirrose e CHC. A presença da bactéria não estava associada aos fatores de risco para o CHC estudados e não apresentou correlação com a gravidade da doença hepática

Abstract: Several studies have shown that chronic Helicobacter (H.) pylori infection is associated with extragastric manifestations including cardiovascular, metabolic, neurodegenerative and autoimmune conditions, skin disorders as well as pancreatic, colorectal and hepatobiliary diseases. In fact, H. pylori was detected in bile samples, gallbladder and liver tissue from patients with chronic cholecystitis, sclerosing cholangitis, chronic hepatitis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma (HCC). Thus, studies verifying the role of H. pylori in the pathogenesis of hepatobiliary diseases are essential for their better understanding. The formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) tissue represent an extraordinary source for retrospective studies where it is possible to correlate the molecular findings with the therapy and the clinical course of diseases. Then, the aym of this study was to verify the presence of H. pylori in FFPE liver tissue from patients with HCC. For this purpose, 86 samples were divided into two groups. The GA group presented 57 tissue specimens from patients with cirrhosis (CH) and HCC. The GB group consisted of 29 liver samples from individuals without liver disease (control group). The DNA was extracted from liver tissue by phenol chloroform method in all samples and the amplification of H. pylori 16S rRNA was performed. Some positive samples for H. pylori 16S rRNA gene were subjected to DNA sequencing. The immunohistochemical staining and laser capture microdissection (LCM) technique were performed on some samples to confirm the diagnosis of H. pylori. The study of bacterial morphology was carried out by transmission electron microscopy (TEM). The results of 16S rRNA gene amplification revealed that 28 samples (49,1%) were positive in GA and 8 samples (27,6%) amplified 16S rRNA gene in GB (p = 0.056). In the GA group, it was not verified relationship between the presence of H. pylori and the risk factors for HCC: infection with hepatitis virus B (p=1.00) and hepatites virus C (p=0.93), alcohool intake (p=0.14), hemocromatosis (p=1.00), alfa-1-antitripsin deficiency and those patients whose etiology for liver disease was considered criptogenic (p=0.61). In the same group, there were no significant differences regarding the presence of the bacteria and data from Chil-Pugh score and MELD (p = 0.29 p = 0.31, respectively). The sequencing results demonstrated that 16S rRNA sequence showed 98% similarity to H. pylori DNA. Immunohistochemistry staining confirmed the presence of H. pylori in liver. Both in LCM and TEM, microorganisms resembling H. pylori were visualized in the sinusoidal spaces, especially in the coccoid form. The results of this study demonstrate that H. pylori was detected in FFPE liver samples of patients with cirrhosis and HCC. The presence of bacteria was not associated with risk factors for HCC and showed no correlation with the severity of liver disease
Subject: Helicobacter pylori
Fígado - Câncer
Cirrose hepática
Microdissecção e captura a laser
Análise de sequência de DNA
Editor: [s.n.]
Citation: GONÇALVES, Elizabeth Maria Afonso Rabelo. Pesquisa do Helicobacter pylori em amostras de fígado não tumoral fixado e emblocado de pacientes com carcinoma hepatocelular = Detection of Helicobacter pylori in formalin-fixed paraffin-embedded non tumoral liver samples from patients with hepatocellular carcinoma. 2015. 1 recurso online (126 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/309793>. Acesso em: 28 ago. 2018.
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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