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Type: DISSERTAÇÃO
Degree Level: Mestrado
Title: Papel da iNOS na produção de citocinas e na expressão das moléculas de adesão dos eosinófilos de camundongos alérgicos
Title Alternative: Role of iNOS in cytokine production and adhesion molecule expression on eosinophils in allergic mice
Author: Pelaquini, Edmar Henrique
Advisor: Ferreira, Heloísa Helena de Araújo
Abstract: Resumo: O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito do tratamento com 1400W, inibidor seletivo da NOS induzível (iNOS), na adesão in vitro a VCAM-1 e ICAM-1 e na expressão das selectinas VLA-4, Mac-1 e LFA-1 nos eosinófilos da medula óssea e do sangue periférico. A produção das citocinas sintetizadas pelos linfócitos T, Th1 e Th2, também foi avaliada nos homogenatos dos pulmões. Verificamos que o conteúdo de eosinófilos estava aumentado nos pulmões dos camundongos não tratados (controles) a partir de 48h após o desafio com OVA. O tratamento dos camundongos alérgicos com 1400W causou redução no infiltrado de eosinófilos somente em 48h. O tratamento com 1400W aumentou a adesão in vitro dos eosinófilos obtidos da medula óssea a ICAM-1 em 24h-48h, enquanto que a adesividade a VCAM-1 estava diminuída em 48h. Nos eosinófilos do sangue, o 1400W diminuiu a adesão a VCAM-1 em 24h-48h. Na análise por citometria de fluxo não foram observadas alterações na expressão do CD11a sobre os eosinófilos da medula óssea ou do sangue periférico obtidos de ambos os grupos. Um aumento da expressão do CD11b nos eosinófilos da medula óssea dos controles foi verificada em 48h, enquanto que, neste período, CD11b e CD49d estavam diminuídas nos eosinófilos do sangue. O tratamento com 1400W aumentou a expressão do CD11b dos eosinófilos da medula óssea em 24h e 48h e provocou efeitos contrários nas células do sangue ao diminuir sua expressão em 24h e aumentar em 48h. Do mesmo modo, efeitos inversos do 1400W sobre a CD49d foram detectados no sangue quando reduziu sua expressão em 24h, aumentando-a em 48h. O desafio com OVA provocou em 24h aumento nos níveis de todas citocinas nos pulmões dos controles. Não foram observadas outras variações significativas nos níveis de IFN-y e TNF-a em nenhum dos grupos. A eotaxina mostrou pico de produção em 48h-72 horas nos animais controles, quando o tratamento com 1400W reduziu sua síntese nos pulmões. A IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 estavam aumentadas nos camundongos controles em 24h, sendo que picos de IL-4 e IL-13 foram detectados em 24h e 48h, respectivamente. Níveis elevados de IL-5 foram observados em 24-48h. O tratamento com 1400W reduziu os níveis de IL-4 no pulmão em 24h-48h após o desafio com OVA, assim como os de IL-5 em 48h e de IL-13 em 48h-72h. Somente em 72h o 1400W diminuiu o nível da IL-10 no pulmão. Em conclusão, nossos resultados sugerem que o envolvimento do NO na modulação da secreção de citocinas derivadas dos linfócitos Th2 e da eotaxina nos pulmões, bem como na expressão das moléculas de adesão nos eosinófilos da medula óssea e do sangue periférico, pode influenciar a migração celular para os pulmões dos camundongos alérgicos. O NO produz um efeito temporal na expressão/função do Mac-1, sugerindo ser esta a principal molécula de adesão envolvida no efluxo dos eosinófilos da medula óssea em 24h, enquanto o Mac-1 e o VLA-4 estão envolvidos na mobilização dos eosinófilos do sangue periférico para o pulmão em 48h após o desafio antigênico.

Abstract: The aim of this study was investigated the effectiveness of treatment with 1400W, a selective inhibitor of inducible NOS (iNOS) in in vitro adhesion to VCAM-1 and ICAM-1 and VLA-4, Mac-1 and LFA-1 expression in eosinophils from bone marrow and peripheral blood. The cytokines synthesized by T lymphocytes, Th1 and Th2 cells, was evaluated in lungs homogenates. As a result we found that the eosinophils were increased from 48h after OVA challenge in lungs of untreated mice (controls). Treatment of allergic mice with 1400W caused a reduction in eosinophils infiltration only after 48h. 1400W increased between 24-48h the in vitro adhesion of bone marrow eosinophils to ICAM-1, whereas adhesion to VCAM-1 was decreased after 48h. In the blood eosinophils, 1400W decreased adhesion to VCAM-1 between 24-48h. Flow cytometric analysis showed no significant changes in the expression of CD11a on bone marrow and peripheral blood eosinophils obtained from both groups. An increased expression of CD11b on bone marrow eosinophils of controls was observed after 48h, while on that period, CD11b and CD49d expression were reduced in blood eosinophils. In the bone marrow eosinophils, treatment with 1400W increased CD11b expression in both 24h and 48h, but in the blood cells caused adverse effects by decreasing expression after 24h and increase after 48h. Similarly, the opposite 1400W effect was detected in the blood cells when CD49d expression had been reduced after 24h and increased after 48h. The OVA challenge resulted in increasing the levels of all cytokines in the control lungs after 24h. There were no other significant variations in the IFN-y and TNF-a levels in both groups. In control animals, the eotaxin showed peak production between 48-72h, while 1400W treatment reduced its synthesis in the lungs. IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13 were increased in control mice after 24 hours, with peaks of IL-4 and IL-13 were detected after 24h and 48h, respectively. Elevated levels of IL-5 were observed between 24-48h. Treatment with 1400W reduced the levels of IL-4 in lung between 24h-48h after OVA challenge, as well as IL-5 in 48 hours and IL-13 in 48h-72h. Only after 72h 1400W decreased the level of IL-10 in the lung. In conclusion, our results suggest that the involvement of NO in modulating the secretion of cytokines derived from Th2 lymphocytes and eotaxin in the lungs, as well as in the adhesion molecules expression in bone marrow and peripheral blood eosinophils may influence cell migration to the lungs of allergic mice. NO produces a temporal effect on the expression / function of Mac-1, suggesting that the main adhesion molecule involved in the efflux of bone marrow eosinophils after 24h, while Mac-1 and VLA-4 were involved in the mobilization of peripheral blood eosinophils to the lungs in 48 h after antigen challenge.
Subject: Óxido nítrico
Eosinófilos
Alergia
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: PELAQUINI, Edmar Henrique. Papel da iNOS na produção de citocinas e na expressão das moléculas de adesão dos eosinófilos de camundongos alérgicos. 2010. 89 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/309634>. Acesso em: 17 ago. 2018.
Date Issue: 2010
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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