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Type: TESE
Title: Identificação de Pneumocystis jirovecii através de métodos moleculares em amostras de pacientes do Hospital de Clínicas da UNICAMP
Title Alternative: Pneumocystis jirovecii identification by molecular methods in pacients samples of the Campinas University
Author: Santos, Cristina Rodrigues, 1979-
Advisor: Aoki, Francisco Hideo, 1954-
Abstract: Resumo: O Pneumocystis jirovecii é um fungo ascomiceto que pode causar pneumonia (PPC) em indivíduos imunossuprimidos e eventualmente em imunocompetentes. Os métodos laboratoriais de baixo custo para detecção ainda é a coloração em lâmina. Os métodos moleculares são considerados mais eficientes e tem oferecido alternativas para o entendimento da biologia e da doença causada por esse microrganismo. O objetivo desse estudo foi detectar a presença de Pneumocystis jirovecii em pacientes com doença pulmonar. O método adotado foi a técnica de coloração de lâmina com azul de toluidina para detecção de cistos, PCR para detecção do fragmento mitocondrial pAZ102-H/E, Nested PCR com primers internos pAZ102-X/Y e sequenciamento pelo método de Sanger para detecção de alterações moleculares na região genômica estudada. Foram coletadas 139 amostras, sendo 102 de lavado broncoalveolar (LBA), 7 de escarro, 10 amostras de sangue periférico (fracionadas em hemácias/leucócitos e plasma) e 10 amostras de soro. Nos resultados da coloração pela técnica de azul de toluidina, 2 amostras de escarro e 1 de LBA foram positivas. Através dos métodos moleculares, 6 amostras foram positivas na primeira PCR e 91 amostras foram positivas pela Nested PCR. Os fragmentos pAZ102-X de 51 amostras foram sequenciadas, 18 amostras apresentaram mutação nos seguintes códon/posição 4406/13217, 4419/13257, 4431/13294, 4439/13316, 4440/13321, 4446/13338, 4452/13357, 4456/13367 e 4457/13371. Os pacientes que apresentaram essas alterações tinham um perfil com doenças pulmonares ou fatores de risco associados à infecção por P. jirovecii. Como a detecção de P. jirovecii, diagnóstico e prevenção de PPC são ligadas a história clínica do paciente, os avanços moleculares podem ser um caminho para diagnóstico de PPC, diferenciando essa pneumonia dos casos de colonização por esse fungo

Abstract: Pneumocystis jirovecii is an ascomycete fungus that can cause pneumonia (PCP) in immunocompromised individuals and possibly in immunocompetent. The low cost of laboratory methods for detection is with conventional staining methods. Molecular methods are considered more efficient and have offered alternatives to the understanding of biology and disease caused by this organism. The aim of this study was to detect the target DNA fragment (mtLSUrRNA) of P. jirovecii in patients with lung disease. We compared the staining technique with molecular methods using toluidine blue for microscopy and "in house" DNA extraction, PCR and Nested PCR for molecular detection and sequencing by the Sanger method to detect molecular alterations in the genomic region studied. It was analyzed 139 samples, such as, 102 bronchoalveolar lavage (BAL), 7 sputum, 10 samples of peripheral blood (fractionated in red blood cells / leukocytes and plasma) and 10 serum samples. The results of the toluidine blue staining technique, two sputum samples and 1 BAL were positive. Through molecular methods, 6 samples were positive in the first PCR and 91 samples were positive by Nested PCR. The pAZ102-X fragments of 51 samples were sequenced, 18 samples had mutations in codon/position 4406/13217, 4419/13257, 4431/13294, 4439/13316, 4440/13321, 4446/13338, 4452/13357, 4456 / 13367 and 4457/13371. Patients who presented these alterations had a profile with lung diseases or risk factors associated with infection by P. jirovecii. As the detection of P. jirovecii, diagnosis and prevention of PCP are linked to clinical history, molecular advances can be a way for diagnosis of PCP, differentiating this pneumonia cases of colonization by the fungus. OBSERVAÇÃOPor favor manter essa palavra em itálico: Pneumocystis jirovecii
Subject: Pneumocystis jirovecii
Infecções oportunistas
Reação em cadeia da polimerase
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FCM - Dissertação e Tese

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