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Type: TESE
Title: Efeito da incubação de enterotoxinas estafilococicas e do lipopolissacaride na agregação e na adesão de plaquetas humanas
Title Alternative: Incubation effects of staphylococcal enterotoxins and lipopolysaccharide in human platelets aggregation and adhesion
Author: Morganti, Rafael Prada
Advisor: Antunes, Edson, 1960-
Abstract: Resumo: A sepsis é a segunda causa de morte em pacientes internados em unidades de tratamento intensivo não coronariano. Pacientes com sepsis apresentam anormalidades plaquetárias como trombocitopenia, prolongamento do tempo de coagulação, coagulação intravascular disseminada, trombose microvascular maciça e sangramentos. Entretanto, os mecanismos envolvidos nestas alterações plaquetárias ainda são mal compreendidos. O objetivo deste trabalho foi investigar as ações do lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, e de enterotoxinas de Staphylococcus aureus (SEA e SEB), na adesão e na agregação de plaquetas humanas, bem como os mecanismos envolvidos nesses fenômenos. As plaquetas foram expostas ao LPS, SEA ou SEB em diferentes concentrações e tempos de incubação para avaliação in vitro da adesão ou agregação. Além disso, realizou-se experimentos para verificar o papel do óxido nítrico (NO) e de espécies reativas de oxigênio nas ações induzidas pelo LPS, SEA e SEB, assim como a sinalização intracelular (mobilização de Ca+2) e ativação do receptor do fibrinogênio glicoproteína IIb/IIIa (GPIIb/IIIa). A incubação de plaquetas com LPS, SEA e SEB por períodos 5 a 120 min inibiu a adesão espontânea das plaquetas ao fibrinogênio, sendo esta inibição dependente da concentração e do tempo de incubação. A adesão de plaquetas ativadas com trombina também foi inibida após incubação com LPS, SEA ou SEB por 5 a 120 min. Porém, a inibição em plaquetas ativadas foi menor quando comparada à inibição da adesão espontânea. Esta inibição ocorreu de forma independente de aumentos intraplaquetários de GMPc e AMPc. Com o objetivo de se entender o mecanismo de ação envolvido na inibição da adesão plaquetária pelo LPS, SEA e SEB as plaquetas foram pré-tratadas com os seguintes agentes farmacológicos: superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido), polietilino glicol superóxido dismutase (seqüestrador de ânion superóxido intracelular), polietileno glicol catalase (degrada peróxido de hidrogênio), puromicina e ciclohexamida (inibidores de síntese protéica). Em conjunto, nossos dados mostraram que o efeito inibitório do LPS não envolve aumento de anion superóxido (O2 -) e de peróxido de hidrogênio (H2O2), nem a formação de proteínas neo-sintetizadas, e alterações na ativação da GPIIb/IIIa. Por outro lado, o LPS reduziu significativamente o influxo externo de cálcio, sem afetar a mobilização intracelular deste cátion. Em relação às enterotoxinas estafilocócicas, a síntese de neo-proteínas e aumento de O2 - não tem papel direto sobre a inibição plaquetária, embora um aumento nas concentrações de H2O2 intracelulares esteja ligado a esta resposta. Em conclusão, a exposição ao LPS inibiu a adesão a agregação plaquetária, dosee tempo-dependente, inibindo a influxo de cálcio; da mesma forma, a incubação com SEA ou SEB inibiu a adesão de plaquetas ao fibrinogênio, por um mecanismo que envolveria a formação de H2O2

Abstract: Sepsis is the second major cause of death in intensive care unit. Septic patients show abnormalities in platelet like thrombocytopenia, prolongation in coagulation time, disseminated intravascular coagulation, deep venous thrombosis and bleedings. However, the mechanisms involved in these platelet alterations are not totally clear. The objective of this work was investigate the actions of lipopolysaccharide (LPS) from E. coli and enterotoxins from Staphylococcus aureus (SEA and SEB), in human platelet adhesion and aggregation, likewise the mechanism involved in these phenomenon. The platelets were exposed to LPS, SEA or SEB in different concentrations and times of incubation in vitro evaluations of adhesion and aggregation. Moreover, experiments to elucidate the participation of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species in the actions of LPS, SEA and SEB, likewise the intracellular sinalization (calcium mobilization) and activation of fibrinogen receptor glycoprotein IIb/IIIa (GPIIb/IIIa) were carry out. The platelets incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min, inhibited the spontaneous adhesion to fibrinogen and this inhibition was dependent of concentration and time of incubation. The thrombin activated adhesion of platelets was concentration and time dependently also inhibited after incubation with LPS, SEA and SEB for 5 to 120 min. However, the activated platelets inhibition was lower when compared to spontaneous adhesion inhibition. This inhibition was not dependent of intracellular levels increase of cGMP and cAMP. To understand the mechanism of action involved in the platelet adhesion inhibition by LPS, SEA and SEB, the platelets were previously treated with pharmacological agents like: superoxide dismutase (superoxide anion scavenger), superoxide dismutase-polyethylene glycol (superoxide anion intracellular scavenger), catalase-polyethylene glycol (Hydrogen peroxide intracellular scavenger), puromycin and cyclohexamide (protein synthesis inhibitors). Our data suggests that the inhibitory effect of LPS neither involve superoxide anion (O2 -) and hydrogen peroxide (H2O2) increase, nor the formation of neo-proteins, and alterations on activation of glycoprotein IIb/IIIa. In contrast, LPS significantly reduce the external calcium influx, without effecting calcium internal mobilization. With regard to staphylococcal enterotoxin, the protein synthesis and rise in O2 - do not play a role in the platelet inhibition; however the increase of H2O2 intracellular concentration was involved in this response. In conclusion, platelet aggregation and adhesion was inhibited after addition of LPS, concentration and time-dependently, inhibiting calcium influx; similary, incubation with SEA or SEB inhibited platelets adhesion to fibrinogen, by a mechanism involving H2O2 formation
Subject: Plaquetas (Sangue)
Lipopolissacarideos
Enterotoxinas
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2008
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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