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Type: DISSERTAÇÃO
Degree Level: Mestrado
Title: Integridade funcional dos linfócitos NK E NK-like T de pacientes com neoplasia de ovário = Functional integrity of NK and NK-like T lymphocytes from ovarian neoplasia patients
Title Alternative: Functional integrity of NK and NK-like T lymphocytes from ovarian neoplasia patients
Author: Silva, Rodrigo Fernandes da, 1984-
Advisor: Petta, Carlos Alberto, 1960-
Abstract: Resumo: As células NK são linfócitos conhecidos pela capacidade de eliminar uma variedade de células malignas, sem a necessidade de estímulo prévio e por meio de um processo de reconhecimento inato, o qual envolve receptores ativadores e inibidores. Esta capacidade também foi observada nos linfócitos NK-like T, porém a via de reconhecimento imunológico envolvida pode ser tanto a inata quanto a adaptativa. Neste estudo, avaliou-se a atividade funcional e a expressão de receptores ativadores DNAM-1, NKp30 e NKp44 das células NK e NK-like T, do sangue e ascite de pacientes com neoplasia de ovário. Foi colhido sangue de 24 pacientes com neoplasia de ovário (11 benignas, Bng; 6 malignas sem metástases, Mlg e 7 malignas com metástases, MlgMt) e ascite (Asc) de 6 pacientes, mediante consentimento assinado. Células mononucleares foram separadas por gradiente de centrifugação. A ativação das células NK e NK-like T foi determinada pela expressão da molécula CD107a por meio da citometria de fluxo, quando coincubadas com as células K562 (proporção 1:1). Foram comparados os efeitos de dois procedimentos de cultivo celular, um de curta duração (18h) empregando meio RPMI-1640 suplementado com SFB (10%), L-glutamina (2mM) e IL-2 (1000UI/ml) e outro de longa duração (21 dias) empregando meio SCGM CellGro suplementado com anti-CD3 (10ng/ml, nos primeiros 5 dias), IL-2 (1000UI/ml) e SFB (10%) em relação à atividade funcional e a expressão dos receptores ativadores. A atividade funcional das células NK pareceu ser afetada em decorrência da evolução da doença. A estimulação com IL-2 de curta duração aumentou a atividade funcional das células NK, mas não significantemente. A estimulação com IL-2 de longa duração aumentou a atividade funcional das células NK significantemente (p<0.001). A porcentagem de células NK expressando os receptores ativadores DNAM-1, NKp30 e NKp44 aumentou significantemente (p<0.05) depois da estimulação com IL-2 de longa duração. As células NK-like T apresentaram baixa atividade funcional nos períodos de estimulação de pré e curta duração e nenhuma atividade na estimulação de longa duração. Foi observado que a integridade funcional das células NK foi comprometida com o desenvolvimento do câncer de ovário. A estimulação de longa duração resultou em um maior número de células NK funcionais quando comparado à de curta duração, conferindo este método para uso imunoterápico. A estimulação de longa duração também foi eficiente no aumento da expressão do receptor ativador DNAM-1 nas células NK, sugerindo este método para reverter à supressão deste receptor, que frequentemente é observada em pacientes com carcinoma de ovário. A falta de ativação das células NK-like T (pré, curta e longa duração) sugere que, no sistema experimental aplicado, estas células não são ativadas pela via imune inata

Abstract: NK cells are lymphocytes known by their ability to eliminate a variety of malignant cells without previous stimulation, in a process involving innate recognition by an array of stimulatory and inhibitory receptors. Similarly, the variant subset of NK-like T lymphocytes has been reported to eliminate tumor cells, but the targeting process might involve either innate or adaptive immune recognition. This study evaluated the functional activation of NK and NK-like T cells, the expression of activating receptors DNAM-1, NKp30 and NKp44 (pre, short- and long-term IL-2 stimulated), from blood and ascites of ovarian neoplasia patients. Blood was collected from 24 patients with ovarian neoplasias after signed consent: 11 benign (Bng), 6 malignant without metastasis (Mlg) and 7 malignant with metastasis (MlgMt). Ascites (Asc) was collected from 6 patients with ovarian neoplasia. Mononuclear cells were separated by gradient centrifugation. NK and NK-like T cells activation (pre, short- and long-term stimulated) was evaluated against K562 (1:1 ratio) by the expression of CD107a, analyzed by flow cytometry. Short-term stimulation with IL-2 (1000UI/ml) was conducted overnight in RPMI-1640 medium supplemented with FBS (10%) and L-glutamine (2mM). Long-term stimulation was conducted by a 21 day culturing process with SCGM CellGro medium supplemented with anti-CD3 (10ng/ml, first 5 days), IL-2 (1000UI/ml) and FBS (10%). The functional activation of NK cells pre stimulated seemed to be impaired with the progression of the disease. Short-term stimulation increased NK cells activation, but not significantly. Long-term stimulation increased NK cells activation significantly (p<0.001). The percentage of NK cells expressing the activating receptors DNAM-1, NKp30 and NKp44 increased significantly (p<0.05) after long-term stimulation. NK-like T cells showed low activation on pre and short-term and none activation on long-term IL-2 stimulation. Long-term stimulation resulted in a much higher number of functional NK cells compared to short-term, entitling this method for adoptive therapy. Long-term stimulation was particularly efficient to up-regulate DNAM-1 activating receptor on NK cells, representing a way to overcome down-regulation demonstrated on patients with ovarian carcinoma. The lack of activation of NK-like T cells (pre, short- and long-term IL-2 stimulated) suggests that, in the method applied; these cells are not activated through innate pathway
Subject: Células matadoras naturais
Neoplasias ovarianas
Imunoterapia
Language: Multilíngua
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2013
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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