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Type: TESE
Degree Level: Doutorado
Title: Efeitos de acido araquidonico na homeostase intracelular de calcio
Author: Catisti, Rosana
Advisor: Vercesi, Anibal Eugenio, 1946-
Abstract: Resumo: O íon cálcio exerce papel essencial no controle de uma série de funções celulares, porém seu excesso pode desencadear tanto a morte celular programada (apoptose) quanto a acidental (necrose). Para avaliarmos os efeitos de ácido araquidônico (AA) na homeostase intracelular de cálcio, utilizamos dois modelos experimentais: mitocôndrias isoladas de fígado de rato e tripanossomatídeos. Comparamos a capacidade de abertura do poro de transição de permeabilidade, utilizando-se concentrações de AA e de carbonil cianeto p-trifluorometoxifenil-hidrazone (FCCP) capazes de causar, de modo similar, a dissipação do potencial elétrico transmembrana (? ?) em mitocôndrias de fígado de rato, na presença de cálcio e do substrato respiratório succinato. O efeito protonofórico de AA e FCCP foi muito pouco modificado por carboxiatractilosídeo. A abertura do poro de transição de permeabilidade, induzida por AA ou FCCP, mostrou ser sensível a catalase, EGTA, ADP, ditiotreitol, ciclosporina A, rotenona e por substratos respiratórios. Isto indica que a condição de estresse oxidativo associada ao estado oxidado dos nucleotídeos de piridina leva à oxidação de tióis das proteínas de membrana, abrindo o poro. Investigamos também o mecanismo de ação de AA na mobilização intracelular de cálcio, em formas tripomastigotas procíclicas de Trypanosoma brucei, promastigotas de Leishmania donovani e amastigotas de Trypanosoma cruzi. Verificamos que o influxo de cálcio é estimulado pela melitina, e bloqueado pelo inibidor da fosfolipase A2 ácido 3-(4-octadecil)-benzoilacrílico (OBAA). AA induz o influxo de cálcio, num mecanismo sensível a LaCb. Entretanto, melitina e AA induzem um aumento na [Ca2+]iem T. brucei, quando incubados em meio livre de Ca2+, indicando mobilização de Ca2+ de organelas intracelulares. Essa hipótese foi sugerida pelos experimentos mostrando que AA promove liberação de Ca2+de acidocalcisomas nestas células. Os resultados mostrando mudanças no potencial de membrana mitocondrial, liberação de alaranjado de acridina e Ca2+ dos acidocalcisomas, e transporte de Ca2+ através da membrana plasmática, sugerem que, em adição à possível estimulação nos processos mediados por canais de Ca2+,AA, na faixa de concentração aqui utilizada, tem outros efeitos não específicos em membranas de tripanossomatídeos

Abstract: Calcium ions play essential role in the control of many cellular functions, however the excess may act as a trigger for both programmed (apoptosis) or accidental cell death (necrosis). To evaluate the role of arachidonic acid (AA) in intracellular calcium homeostases, we used two experimental models: isolated rat liver mitochondria and trypanosomatids. We have compared the PTP opening ability of AA with that of carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (FCCP) at concentrations that cause similar quantitative dissipation of the membrane potential (? ?) in Ca2+-Ioaded rat liver mitochondria respiring on succinate. The protonophoric effects of AA and FCCP were only slightly modified by carboxyatractyloside and were followed by PTP opening, sensitive to catalase, EGTA, ADP, dithiothreitol, cyclosporin A, rotenone or NAD(P)H-linked substrates. These results indicate that a condition of oxidative stress associated with the oxidized state of PN underlies membrane protein thiol oxidation and PTP opening. We also studied the AA induced-calcium mobilization in Trypanosoma brucei procyclic trypomastigotes, Leishmania donovani promastigotes and Trypanosoma cruzi amastigotes. We verified that Ca2+influx was also stimulated in a dose-dependent manner (50-400 nM) by the amphiphilic peptide melittin. This effect was blocked by the phosphqlipase A2 inhibitor 3-(4-octadecyl)-benzoylacrylic acid. The unsaturated fatty acid AA, in the range of 10-75 µM, induced Ca2+entry by a mechanism sensitive to LaCb. However, both melittin and AA induced increase in [Ca2+]i in T. brucei procyclic trypomastigotes incubated in Ca2+-free medium implying Ca2+ mobilization trom intracellular stores. This hypothesis was supported by experiments showing that AA promoted Ca2+release from the acidocalcisomes of these cells. The results showing changes in mitochondrial membrane potential, release of acridine orange and Ca2+from the acidocalcisomes and Ca2+release across the plasma membrane suggest that in addition to the stimulation of a Ca2+channel mediated process, AA, in the range of concentrations used here, have other nonspecific effects on the trypanosomatids membranes
Subject: Ácidos graxos
Tripanossomo
Mitocôndria
Cálcio
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2001
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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