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Type: TESE
Title: Estresse oxidativo em camundongos knockout para o receptor de LDL : papel dos substratos redutores de NADP+ mitocondrial e dos niveis de 'Ca POT.2+' intracelular
Title Alternative: Oxidative stress in LDL receptor knockout mice : role of NADP+ linked substrates and intracellular 'Ca POT.2+' levels
Author: Paim, Bruno Alves
Advisor: Vercesi, Anibal Eugenio, 1946-
Abstract: Resumo: Neste trabalho, o estresse oxidativo em mitocôndrias isoladas de fígados de camundongos knockout para o receptor de LDL (LDLr-/-) foi caracterizado por apresentar um menor conteúdo de isocitrato mitocondrial, uma reduçãoda razão GSH/GSSG e um maior conteúdo de proteínas oxidadas quando comparados a camundongos controles. A maior produção de EROs pelas mitocôndrias de camundongos LDLr-/- foi prevenida quando as mesmas foram incubadas na presença de isocitrato exógeno, o qual é capaz de manter NADPH completamente reduzido. Resultados semelhantes foram obtidos quando os animais foram tratados com solução de citrato solução de citrato de sódio 55 mM/ ácido cítrico 67 mM durante duas semanas, onde houve uma redução na produção de EROs pelas mitocôndrias isoladas de fígado assim como uma recuperação parcial no consumo de oxigênio mantido por substratos endógenos bem como no perfil de oxidação dos nucleotídeos de piridina. Os linfócitos de camundongos LDLr-/- também apresentaram elevação na produção de EROs, celular e mitocondrial bem como uma elevação nos níveis de Ca2+, citosólico e mitocondrial, quando comparados a camundongos controles. Uma vez que [Ca2+] intracelular tem demonstrado participar na modulação da resposta Th1 e Th2 e no processo de ativação linfocitária, decidimos estudar algumas citocinas em camundongos LDLr-/-. As citocinas Th1 (IL-2 e TNF- a) e Th2 (IL-4 e IL-10) se mostraram elevadas quando comparadas a camundongos controles. A elevação das citocinas Th1 e Th2, a geração de EROs e as elevações das concentrações de Ca2+ foram parcialmente inibidas após tratamento dos camundongos com verapamil, um antagonista de canal de cálcio tipo L. Os resultados nos levam a concluir que o estresse oxidativo observado em mitocôndrias isoladas de fígados de camundongos LDLr-/- ocorre em resposta a uma redução no conteúdo de substratos endógenos redutores de NADPH e que pode, ao menos em parte, ser corrigido após suplementação oral com solução de citrato. Além do mais, foi demonstrado que o Ca2+, em linfócitos isolados de baços de camundongos LDLr-/-, possui papel fundamental modulando a geração de EROs e a produção de citocinas. Estas alterações são provavelmente relacionadas com o processo de ativação linfocitária, em razão das lesões ateroscleróticas observadas no arco aórtico dos camundongos LDLr-/-, formadas espontaneamente

Abstract: In this work, oxidative stress in liver mitochondria isolated from LDLr-/- mice was further characterized by showing a lower mitochondrial isocitrate content, lower matochondrial GSH/GSSG ratio and a higher liver content of protein carbonyls as compared to control mice. The higher rate of ROS production in LDLr -/- mitochondria was also prevented by the presence of exogenous isocitrate which maintains NADP+ fully reduced. Similar results were obtained when the annimals were treated with drinking water containing 55 mM sodium citrate/67 mM citric acid during two weeks, when was observed lower levels of ROS production, an improve in the rate of oxygen consumption supported by NADP-linked substrates as well as a higher capacity to sustain reduced NAD(P)H in liver mitochondria. The spleen lymphocytes isolated from k/o mice also showed higher ROS generation by lymphocyte mitochondria and whole cell, and higher levels of cytosolic and mitochondrial Ca2+ compared to control mice. As intracellular Ca2+ has been shown to affect Th1 and Th2 priming and lymphocyte activation we evaluated some cytokines in LDL receptor k/o mice compared to controls. Th1 cytokines (interleukin-2 and TNF-a), as well as Th2 cytokines (interleukin-10 and interleukin-4) were higher in k/o mice than in control. The increase of Th1 and Th2 cytokines, ROS generation, and Ca2+ concentration were partially inhibited by treatment of the k/o mice with verapamil, an L-type Ca2+ channel antagonist. In conclusion, the data demonstrate that the liver mitochondrial oxidative stress in hypercholesterolemic LDL receptor knockout mice is the result of a low content of mitochondrial NADPH-linked substrates in the intact animal that can be, at least in part, replenished by oral administration of citrate. Also, we demonstrate that Ca2+ presents a central role in spleen mononuclear cell from hypercholesterolemic LDL receptor knockout mice modulating ROS generation and cytokines production. These alterations are probably related to lymphocyte activation due the expontaneous atherosclerotic lesion observed in aortic arch of k/o mice
Subject: Mitocôndria
Hipercolesterolemia
Citocinas
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2008
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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