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Type: TESE
Title: Padronização e implantação da técnica de antigenemia para monitorização da infecção pelo HHV-6 e HHV-7 e avaliação da co-infecção com HCMV no pós transplante hepático
Title Alternative: Standardization and implantation of antigenemia technique for HHV-6 and HHV-7 infection monitoring and evaluation of co-infection with HCMV after liver transplantation
Author: Sampaio, Ana Maria, 1970-
Advisor: Boin, Ilka de Fatima Santana Ferreira, 1953-
Abstract: Resumo: O herpes vírus humano HHV-6 e HHV-7 pertencem à subfamília herpes virinae, família herpes viridae, são vírus universais e após infecção primária permanecem latentes no organismo, podendo ser reativados por período de imunossupressão. O objetivo da pesquisa visou a padronização e implantação da antigenemia para diagnóstico precoce de HHV-6 e HHV-7 e a realização da sorologia para HHV-6 em pacientes submetidos ao transplante de fígado do Hospital das Clínicas da Unicamp. A partir dos dados obtidos da antigenemia para HHV-6 e HHV-7, avaliou com os achados de antigenemia do HCMV, N-PCR para HCMV, HHV-6, HHV-7 e outros aspectos clinico-laboratoriais. O protocolo foi seguido de acordo com os requerimentos para pesquisas e foi aprovado pelo Comitê de Ética Institucional da Faculdade de Ciências Médicas (FCM) da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp). Conseguiu-se para o estudo amostras de 32 pacientes, com idade mediana de 47 (18-66) anos, sendo 20 (62,5%) do sexo masculino e 12 (37,5%) do sexo feminino. A monitorização dos pacientes foi realizada prospectivamente desde o pré-transplante e no pós-transplante, de modo semanal no 1º e 2º, quinzenal no 3º mês e mensal do 4º mês até o final do 6º mês. A partir de linfócitos extraídos de sangue periférico realizou-se a detecção de antígenos de HHV-6 com anticorpos monoclonais C65206M (marca Biodesign International, France) e MAB8535 (marca Biodesign International - USA) e conjugados de soro de coelho anti-IgG de camundongo Z0412-1 (marca Dako - CA, USA) e soro de cabra anti-IgG de coelho marcado com peroxidase 81-6120 (marca Zymed, CA, USA). Para a detecção de antígenos de HHV-7 foi utilizado o anticorpo monoclonal de rato KR4 (marca Advance Biotechnologies, Canada), conjugado soro de coelho anti-imunoglobulina de camundongo P0260 (marca Dako Cytomation, USA) e conjugado soro de cabra anti-IgG de coelho 81-6120 (marca Zymed, CA, USA) diluídos em PBS/BSA e aplicados sobre a fixação celular. Foi realizado a detecção de anticorpos IgM anti HHV-6 pelo teste de Elisa (marca Panbio, USA). Com essas metodologias a detecção de IgM anti HHV-6 foi positiva em 15,6% dos pacientes no pré transplante, 25% na quarta semana, 40,6% na 12 semana e em 46,9% na 24 semana após o enxerto. A antigenemia para HCMV, HHV-6 e HHV-7 foi positiva em 46,9%, 62,5% e 46,8% respectivamente. A N-PCR para HCMV e HHV-6 ocorreu em 81% dos casos, e para HHV-7 foi de 46,8%. Detectou-se que 50% dos pacientes estudados tiveram doença por HCMV. A doença causada pelo HHV-6 foi em 46,8% dos pacientes e em 15,6% para HHV-7. A concomitância de doenças foi observada nos pacientes com HCMV e HHV-6 em 21,9% e em 15,6% dos pacientes com HHV-6 e HHV-7. A doença causada pelos beta herpes vírus foi detectada com maior frequência ao redor da quinta semana. E os episódios de doença para HHV-6 e HHV-7 surgiram antes do aparecimento da doença por HCMV. Este estudo confirma a relevância da infecção pelo HCMV, HHV-6 e HHV-7 e a importância do monitoramento através de técnicas para a detecção precoce desses agentes, possibilitando a utilização de um tratamento preemptivo, com redução do risco de doença

Abstract: Introduction: The human herpes viruses type 6 (HHV-6) and 7 (HHV-7) belong to the herpes virus subfamily, herpes viridae family, are universal viruses and after primary infection remain latent in the organism and may be reactivated during an immunosuppression period. The aims of the research were to standardize, implement and monitor antigenemia for early diagnosis of HHV-6 and HHV-7 and serology for HHV-6 in patients who underwent liver transplantation in the Hospital of the State University of Campinas. The data obtained for HHV-6 and HHV-7 antigenemia were correlated with results for HCMV, N-PCR for HCMV, HHV-6, HHV-7 and other clinical and laboratorial aspects. The protocol was followed according to the research requirements and was approved by the Institutional Ethics Committee of the State University of Campinas. Thirty-two patients were studied, mean age 47 (18-66) years old, in which 20 (62.5%) were male and 12 (37.5%) were female. The monitoring of the patients was carried out prospectively since pre-transplantation and during post-transplantation period; weekly in the first and second month, fortnightly in the third month and monthly up to the sixth month. Detection of HHV-6 antigens was held from lymphocytes extracted from peripheral blood using monoclonal antibodies C65206M (Biodesign International, France) and MAB8535 (Biodesign International-USA); rabbit anti-mouse IgG Z0412-1 (Dako, USA) conjugate serum and goat anti-rabbit marked with peroxidase IgG 81-6120 (Zymed, USA) conjugate serum. For HHV-7 antigens detection, KR4 (Advance Biotechnologies, Canada) mouse monoclonal antibody, conjugate P0260 (Dako Cytomation, USA) rabbit anti-mouse IgG serum and conjugate goat anti-rabbit IgG serum 81-6120 (Zymed, USA) were used, diluted in PBS/BSA and applied over the cell fixation. IgM anti HHV-6 antibody detection was held by ELISA test (Panbio, USA). Using this methodology IgM anti HHV-6 detection was positive for 15.6% of the patients in pre-transplantation, 25% in the fourth week, 40,6% in the twelfth week and 46,9% in the 24th week after the transplantation. HCMV, HHV-6 and HHV-7 antigenemia was positive in 46.9%, 62.5% and 46.8%, respectively. HCMV and HHV-6 PCR occurred in 81% of the cases and for HHV-7, 46.8% of the cases. It was detected that 50% of the patients manifested HCMV disease. Disease manifested in 46.8% and 15.6% of the patients for HHV-6 and HHV-7, respectively. Concomitance of the diseases was observed in patients with HCMV and HHV-6 in 21.9% and 15.6% of the patients with HHV-6 and HHV-7. The disease caused by beta herpes virus was detected with higher frequency around the fifth week. HHV-6 and HHV-7 disease episodes appeared prior to HCMV disease. This study confirms the relevance of HCMV, HHV-6 and HHV-7 infection and the importance of monitoring through techniques for early detection of these agents, allowing the usage of a preemptive treatment, reducing the risk of disease
Subject: Fígado - Transplante
Citomegalovírus
Viroses
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2012
Appears in Collections:FCM - Tese e Dissertação

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