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Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Estudo clínico do conteúdo inflamatório e infeccioso de dentes com insucesso do tratamento endodôntico = Clinical study of the inflammatory and infectious content of teeth with failure of endodontic treatment
Title Alternative: Clinical study of the inflammatory and infectious content of teeth with failure of endodontic treatment
Author: Barbosa-Ribeiro, Marlos 1986-
Advisor: Gomes, Brenda Paula Figueiredo de Almeida
Abstract: Resumo: Introdução: O conteúdo infeccioso dos canais radiculares, incluindo bactérias e seus bio-produtos como o LTA (ácido lipoteicóico), e produtos derivados de genes de virulência, podem induzir a liberação de citocinas pró-inflamatórias (CPI) e metaloproteinases de matriz (MMPs) causando injuria aos tecidos periapicais. Os objetivos deste estudo foram: (Capítulo I) a) caracterizar os microrganismos Gram-positivos e estabelecer a prevalência de Enterococcus faecalis nas diferentes fases da terapia endodôntica; b) investigar a presença de LTA; (Capítulo II) c) monitorar in vivo o efeito do preparo químico-mecânico (PQM) e da medicação intracanal (MIC) na redução de bactérias cultiváveis (BC), LTA, CPI (TNF-? e IL1-?) e MMPs (-2, -3, -8, -9 e -13) em canais radiculares de dentes com periodontite apical pós-tratamento endodôntico; (Capítulo III) d) investigar a suscetibilidade antimicrobiana de E. faecalis isolados e a prevalência dos seus fatores de virulência. Metodologia: Vinte canais radiculares infectados de dentes unirradiculares foram divididos aleatoriamente em dois grupos de acordo com a substância química auxiliar (SQA) utilizada durante o PQM (n = 10 por grupo): G1 - clorexidina (CLX) 2% gel e G2 - hipoclorito de sódio (NaOCl) 6%. As amostras do conteúdo infeccioso e inflamatório dos canais radiculares foram obtidas usando cones de papel estéreis antes (C1) e após (C2) o PQM e após 30 dias com MIC (Ca[OH]2 + clorexidina 2% gel) (C3). (Capítulo I) A identificação microbiana foi realizada por testes bioquímicos; BC foram determinadas por contagem das unidades formadoras de colônia (UFC/mL); os níveis de LTA foram mensurados usando o ensaio imunoenzimático (ELISA) (pg/mL); (Capítulo II) CPIs e MMPs foram também mensuradas usando o ensaio imunoenzimático (ELISA) (pg/mL); (Capítulo III) a suscetibilidade antimicrobiana de diferentes antibióticos foi determinada pela concentração inibidora mínima (CIM) utilizando o método do E-test. Os genes de virulência (ace, asa, asa373, cylA, efaA, esp e gelE) dos E. faecalis isolados foram detectados através da técnica de PCR. Resultados: (Capítulo I) 82 espécies bacterianas Gram-positivas, de um total de 102 bactérias isoladas, foram encontradas nos canais radiculares (62 na C1, 4 na C2 e 16 na C3). Os gêneros mais prevalentes foram Actinomyces spp, Aerococcus spp, Enterococcus spp, Gemella spp and Staphylococcus spp. E. faecalis foi a bacteria mais prevalente. BC (101,2±79,2), LTA (94,1±61,7), (Capítulo II) CPI (TNF-?: 8,8±4,7 e IL1-?: 1,2±0,4) e MMPs (MMP-2: 803,7±96,4; MMP-3: 453,9±229,3; MMP-8: 245,9±122,4; MMP-9: 129,4±29,6 e MMP-13: 70,8±12,8) estavam presentes em todas as amostras (C1). Foi encontrada diminuição dos níveis globais de BC, LTA, CPI e MMPs, em todos os grupos (P < 0,05) na C2. (Capítulos I e II) O percentual de redução na C2 foi o seguinte: BC (94,4%), LTA (60,8%), CPI (TNF-?: 89,7% e IL1-?: 91,6%) e MMPs (MMP-2: 7,8%; MMP-3: 30,3%; MMP-8: 6,9%; MMP-9: 6% e MMP-13: 13,9%) (P < 0,05). Não houve diferença estatística entre as SQA testadas na redução do conteúdo infeccioso e inflamatório na C2 (P > 0,05). O percentual de redução na C3 foi o seguinte: BC (16,7%) (P > 0,05), LTA (39%) (P < 0,05) e MMP-8 (2,4%) (P > 0,05). Por outro lado, observou-se aumento de TNF-?, IL1-?, MMP-2 (P < 0,05), MMP-3, MMP-9 e MMP-13 (P > 0,05) na C3. A MIC foi efetiva na redução de LTA no G1; e BC, MMP-3 e MMP-8 no G2 (P < 0,05). No entanto, houve aumento de todas as CPIs e MMPs (-3, -8, -9 e -13) no G1 e (-2 e -13) no G2 (P < 0,05). (Capítulo III) Amoxicilina + ácido clavulânico foi efetivo contra todas as cepas. Resistência intermediária de algumas cepas foi observada para Amoxicilina (5%), Azitromicina (20%), Benzilpenicilina (5%), Ciprofloxacina (15%), Doxiciclina (5%), Eritromicina (75%), Tetraciclina (10%) e Vancomicina (15%). Total resistência a Clindamicina (60%), Clorafenicol (5%), Gentamicina (65%), Metronidazol (95%), Moxifloxacina (5%) e Rifampicina (10%) foi observada para algumas cepas. Em relação aos fatores de virulência dos E. faecalis isolados, houve detecção para ace (100%), asa (60%), asa373 (15%), esp (70%) e gelE (75%). Em contrapartida, os genes cylA e efaA não foram detectados. Conclusão: (Capítulos I e II) Independente da utilização de CLX ou NaOCl, o PQM é efetivo na redução do conteúdo infeccioso/inflamatório de canais radiculares de dentes com insucesso do tratamento endodôntico. A MIC elevou os níveis de TNF-?, IL-1? e MMP-2. (Capítulo III) Amoxicilina + Ác. Clavulânico mostrou atividade antimicrobiana para todas as cepas de E faecalis testadas, enquanto que alguns isolados apresentaram resistência a Clindamicina, Clorafenicol, Gentamicina, Metronidazol, Moxifloxacina e Rifampicina. Todas as cepas de E. faecalis apresentaram os genes ace, asa, asa373, esp e gelE

Abstract: Introduction: The infectious contents of root canals, including bacteria and their by-products such as LTA (lipoteichoic acid) and derived products of virulence genes can induce the release of proinflammatory cytokines (PIC) and matrix metalloproteinases (MMP), causing injuries to the periapical tissues. The aims of this study were: (Chapter I) a) to characterize the Gram-positive microorganisms and to establish the prevalence of Enterococcus faecalis in the different phases of the endodontic therapy; b) to investigate the presence of LTA, (Chapter II) PIC and MMP, and also to monitor in vivo the effect of chemomechanical preparation (CMP) and intracanal medication (ICM) on the reduction of cultivable bacteria (CB), LTA, PIC (TNF-? and IL1-?) and MMPs (-2, -3, -8, -9 and -13) in the root canals of teeth with post-treatment apical periodontitis; and (Chapter III) c) to investigate the prevalence of virulence factors and the antimicrobial susceptibility of E. faecalis isolates. Methods: Twenty infected root canals of single-rooted teeth were randomly assigned into two groups according to the irrigant used during CMP (n = 10 per group): G1 - 2% chlorhexidine (CHX) gel and G2 - 6% sodium hypochlorite (NaOCl). Root canal contents were taken by using paper points before (S1) and after CMP (S2) and after 30 days of ICM (Ca[OH]2 + 2% CHX gel) (S3). (Chapter I) The microbial identification was performed using biochemical tests; CB was determined by counting the colony-forming unit (CFU/mL); LTA levels were measured using enzyme-linked immunosorbent assay (pg/mL);, (Chapter II) PICs and MMPs levels were measured by using enzyme-linked immunosorbent assay (pg/mL); (Chapter III) the antimicrobial susceptibility of different antibiotics was determined by the minimum inhibitory concentration (MIC) by using the E-test method. E. faecalis virulence factors (ace, asa, asa373, cylA, efaA, esp and gelE) were detected by PCR assay. Results: (Chapter I) A total of 82 Gram-positive bacteria species, out of 102 bacteria isolated, were found in the root canals (62 in S1, 4 in S2 and 16 in S3). The most prevalent genera were Actinomyces spp, Aerococcus spp, Enterococcus spp, Gemella spp and Staphylococcus spp. E. faecalis was the most frequent bacteria isolated. CB (101.2±79.2), LTA (94.1±61.7), (Chapter II) PICs (TNF-?: 8.8±4.7 and IL1-?: 1.2±0.4) and MMPs (MMP-2: 803.7±96.4; MMP-3: 453.9±229.3; MMP-8: 245.9±122.4; MMP-9: 129.4±29.6 and MMP-13: 70.8±12.8) were present in all S1 samples. Decrease of the overall levels was found in all groups (P < 0.05) in S2 samples. (Chapters I and II) Reduction percentage in S2 was the following: CB (94.4%), LTA (60.8%), PIC (TNF-?: 89.7% and IL1-?: 91.6%) and MMPs (MMP-2: 7.8%; MMP-3: 30.3%; MMP-8: 6.9%; MMP-9: 6% and MMP-13: 13.9%) (P < 0.05). There was no difference between the chemical substances tested on the infectious content reduction in S2 (P > 0.05). Reduction percentage in S3 was the following: CB (16.7%) (P > 0.05), LTA (39%) (P < .05), and MMP-8: (2.4%) (P > 0.05). On the other hand, there was an increase of TNF-?, IL1-?, MMP-2 (P < 0.05), MMP-3, MMP-9 and MMP-13 (P > 0.05) levels in S3. ICM was effective in reducing LTA in G1; and CB, MMP-3 and MM-8 in G2 (P < 0.05). However, there was an increase of all PCI and MMPs in S3 for G1 (-3, -8, -9 and -13) and G2 (-2 and -13) (P < 0.05). (Chapter III) Amoxicilin + clavulanate was effective against the all strains. Intermediate resistance of some strains was observed for Amoxicillin (5%), Azithromycin (20%), Benzylpenicillin (5%), Ciprofloxacin (15%), Doxycycline (5%), Erythromycin (75%), Tetracycline (10%) and Vancomycin (15%). A total resistance to Clindamycin (60%), Chloramphenicol (5%), Gentamicin (65%), Metronidazole (95%), Moxifloxacin (5%) and Rifampicin (10%) was observed for some strains. In relation to the virulence factors of E. faecalis isolates, there was detection of ace (100%), asa (60%), asa373 (15%), esp (70%) and gelE (75%) genes. However, cylA and efaA genes were not detected. Conclusion: (Chapters I and II) Regardless the use of NaOCl or CHX, CMP is effective in reducing the infectious/inflammatory content of the root canals of teeth with endodontic treatment failure. The MIC increased the levels of TNF-?, IL-1? and MMP-2. (Chapter III) Amoxicillin + Clavulanate showed antimicrobial activity against all strains of E faecalis tested, while some isolates showed resistance to Clindamycin, Chloramphenicol, Gentamicin, Metronidazole, Moxifloxacin and Rifampicin. All strains of E. faecalis had the genes ace, asa, asa373, esp and gelE
Subject: Bactérias
Metaloproteinases da matriz
Testes de sensibilidade bacteriana
Fatores de virulência
Citocinas
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FOP - Tese e Dissertação

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