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Type: TESE
Degree Level: Doutorado
Title: Influência da fluoxetina sobre a resposta imuno-inflamatória relacionada à doença periodontal
Title Alternative: Effects of fluoxetine on immunoinflammatory responses associated with periodontal disease
Author: Almeida, Luciana Salles Branco de
Advisor: Rosalen, Pedro Luiz, 1960-
Abstract: Resumo: A fluoxetina é um droga inibidora seletiva da recaptação de serotonina que apresenta propriedades imunomoduladoras e antiinflamatórias. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da fluoxetina sobre a resposta imuno-inflamatória relacionada à doença periodontal (DP). In vitro, avaliou-se a influência da fluoxetina sobre a capacidade das células dendríticas (DCs) em apresentar antígeno aos linfócitos T. As DCs foram obtidas da medula óssea de camundongos C57BL/6 e diferenciadas utilizando-se GM-CSF (20 ng/mL). As DCs foram tratadas com a fluoxetina (concentrações: 0,01, 0,1 ou 1 ?M) para análise da produção de citocinas e quimiocinas, bem como da expressão de MHC-II e moléculas co-estimuladoras (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) aos linfócitos T, utilizando-se ensaios de ELISA e citometria de fluxo respectivamente. Culturas de DCs e linfócitos T reativos ao Aggregatibacter actinomycetemcomitans (×Aa-T) foram utilizadas para avaliação de proliferação/ativação de linfócitos T. A desipramina, um inibidor seletivo da recaptação de norepinefrina, também foi incluída nos ensaios in vitro para comparação. In vivo, avaliou-se os efeitos da fluoxetina sobre a resposta inflamatória e a destruição tecidual utilizando-se modelo de DP induzida por ligadura. Ratos Wistar machos (SPF) foram submetidos à colocação de ligadura em torno dos primeiros molares inferiores e divididos em 3 grupos experimentais (n=10 animais/grupo): 1) ratos sem ligadura e sem tratamento (grupo controle); 2) ratos com ligadura e tratados com solução salina (grupo ligadura); 3) ratos com ligadura e tratados com a fluoxetina (20 mg/kg/dia, grupo ligadura + fluoxetina). Análises de reabsorção óssea na região de furca (lâminas coradas com H&E) e de colágeno no tecido conjuntivo da mesial dos primeiros molares (coloração de picrosirius) foram realizadas nos ratos submetidos a 15 dias de indução da DP. Tecidos gengivais de ratos submetidos a 3 dias de indução da DP foram submetidos às seguintes análises: expressão de IL-1?, COX-2, MMP-9 e iNOS utilizando-se RT-PCR e atividade da MMP-9 utilizando-se zimografia. Como resultados, a fluoxetina diminuiu a produção de IL-12, IL-1?, TNF-?, RANTES e MIP-1??pelas DCs estimuladas com LPS (P < 0,05, ANOVA, teste t de Student), bem como diminuiu significativamente a expressão de ICOSL. Além disso, reduziu a proliferação de ×Aa-T estimulados com Aa pelas DCs. A serotonina (5- HT) aumentou a proliferação de ×Aa-T, indicando que os efeitos da fluoxetina são independentes da 5-HT. A desipramina apresentou perfil semelhante à fluoxetina nos ensaios in vitro. No estudo in vivo, a fluoxetina reduziu a perda óssea em região de furca quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05 ANOVA, teste t de Student) e manteve a porcentagem de fibras colágenas com níveis similares ao grupo controle (P > 0,05). Ainda, a fluoxetina reduziu a expressão de IL-1??e COX-2 e a atividade da MMP-9 quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05). Em conjunto, os dados demonstram que a fluoxetina diminuiu a capacidade de apresentação de antígeno das DCs, bem como a resposta inflamatória, a reabsorção óssea e a perda de colágeno na DP, indicando que ela pode constituir uma abordagem terapêutica promissora como moduladora da resposta do hospedeiro na DP

Abstract: Fluoxetine is a selective serotonin reuptake inhibitor presenting immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The aim of this study was to evaluate the fluoxetine effects on immunoinflammatory response associated with periodontal disease (PD). The in vitro study evaluated the effects of fluoxetine on antigen-presentation capacity of dendritic cells (DCs). Bone marrow DCs obtained from C57BL/6 wild type mice were differentiated using GM-CSF (20 ng/mL). DCs were treated with fluoxetine (concentrations of 0.01, 0.1 or 1 ?M) for subsequent cytokine/chemokine assays (ELISA) and analysis of expression of MHC-class II and co-stimulatory molecules (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) to T cell activation using flow cytometry. Fluoxetine was also applied to cultures with both DCs and Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)-reactive T cells (×Aa-T), which were used for analysis of T cells proliferation/activation using thymidine and ELISA assays. Desipramine, a selective norepinephrine reuptake inhibitor, was also tested in vitro for comparison to fluoxetine. In vivo, male Wistar rats received ligature placement around mandibular first molars and were randomly assigned into three experimental groups (n=10/group): 1) Control rats (without ligature); 2) rats with ligature + placebo (saline; oral gavage); 3) rats with ligature + fluoxetine (20 mg/kg/day in saline; oral gavage). Histometric and histological analyses were performed for measurement of loss of bone in furcation region (H&E stain) and collagen fibers (picrosirius red stain) in the connective tissue of rats submitted to 15 days of PD induction. Gingival tissues were collected from animals submitted to 3 days of PD induction for analyses of mRNA expression of IL-1?, COX-2, MMP-9 and iNOS using RT-PCR, measurement of total protein concentration and MMP-9 activity using zymogram. Fluoxetine suppressed IL 12, IL-1?, TNF-?, RANTES and MIP-1??production by LPS-stimulated DCs (P < 0.05, ANOVA, Student's t test), as well as significantly reduced the expression of ICOS-L. Fluoxetine suppressed the proliferation of ×Aa-T stimulated with Aa-antigen presentation by DCs from co-cultures. When applied to ×Aa-T/DCs co-cultures, serotonin (5-HT) increased T cell proliferation, indicating that fluoxetine effects are independent of 5-HT. Desipramine effects were similar to those of fluoxetine. In the in vivo study, fluoxetine reduced alveolar bone loss as compared to ligature group (P < 0.05, ANOVA, Student's t test) and maintained collagen fibers levels similarly to control group (P > 0.05). Fluoxetine reduced IL-1??and COX-2 expression, as well as MMP-9 activity, from gingival tissues when compared to ligature group (P < 0.05). Altogether, data showed that fluoxetine can modulate the antigenpresentation capacity of DCs and reduce inflammatory response and loss of bone and collagen associated with PD. In conclusion, fluoxetine can modulate both immune and inflammatory responses on PD, suggesting that it may constitute a new therapeutic approach for modulation of host response in periodontal therapy
Subject: Doenças periodontais
Células dendríticas
Inflamação
Reabsorção óssea
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2011
Appears in Collections:FOP - Tese e Dissertação

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