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Type: DISSERTAÇÃO
Degree Level: Mestrado
Title: Imunolocalização de CSF-1, OPG e RANKL no periodonto relacionado ao esmalte de incisivos de ratos em erupção normal e contida
Title Alternative: Immunolocalization of CSF-1, OPG and RANKL in the enamel-related periodontium of rat incisors in normal and immobilized eruption
Author: Neves, Juliana dos Santos, 1982-
Advisor: Novaes, Pedro Duarte, 1960-
Abstract: Resumo: Nos incisivos de ratos a face do alvéolo relacionada ao esmalte é continuamente reabsorvida do lado interno e neoformada no lado externo. Estudo realizado em nosso laboratório mostrou que em incisivos de ratos contidos por um período de 18 dias, há uma substituição de reabsorção óssea na face do alvéolo relacionada ao esmalte por neoformação óssea, onde osteoclastos foram substituídos por osteoblastos. CSF-1 e RANKL estimulam a proliferação e diferenciação de osteoclastos enquanto a OPG possui potente atividade inibitória da osteoclastogênese. O objetivo deste estudo foi analisar a distribuição e a intensidade do CSF-1, RANKL e OPG nos tecidos periodontais relacionados ao esmalte (PRE), de incisivos inferiores de ratos em erupção normal e após período de 18 dias de contenção, utilizando método imunohistoquímico e associando a análise quantitativa de osteoclastos. Quinze ratos Wistar machos tiveram seu incisivo inferior esquerdo imobilizado por meio de um fio de aço preso ao 1° molar inferior esquerdo por 18 dias. Quinze ratos com o incisivo esquerdo em erupção normal foram utilizados como controle. A taxa de erupção foi medida por meio de uma marca feita na face labial da coroa. No 18º dia de experimento os animais foram sacrificados e a região da crista alveolar do incisivo foi separada. Os incisivos de 12 ratos (6 controles e 6 contidos) foram fixadas e processadas para inclusão em Paraplast e reação imunohistoquímica foi realizada utilizando anticorpos primários anti-CSF-1, OPG e RANKL. A intensidade de marcação do folículo dentário foi quantificada através de medida da densidade óptica, utilizando o ¿software¿ de análise de imagens Leica QWin (Leica imaging systems, Cambridge, UK ) e ambos os grupos foram comparados pelo test t não-pareado. Para verificar a atividade osteoclástica, os incisivos de 18 ratos (9 controles e 9 contidos) foram fixadas e processadas para inclusão em Historesina e foram realizadas a evidenciação da fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) e a contagem de osteoclastos TRAP positivos presentes em toda a extensão do osso alveolar que circunda o esmalte. A contenção com fio de aço mostrou-se eficiente em imobilizar o incisivo. A diferença na quantidade de osteoclastos entre os grupos foi significante (p<0.001), sendo que no incisivo normofuncional a quantidade destes foi aproximadamente três vezes maior que no contido. Para o CSF-1 e OPG não houve, no folículo dentário, diferença estatisticamente significante na intensidade de marcação entre os grupos (p>0.05). Para RANKL o grupo contido apresentou-se com intensidade de marcação menor do que o normofuncional (p<0.01). As moléculas estudadas estavam presentes no PRE, da região da crista de incisivos inferiores de ratos, em erupção normal e contida, sendo que na condição contida houve uma diminuição na intensidade de RANKL e da quantidade de osteoclastos. Diante desta observação, podemos concluir que alterações nos tecidos que compõem o PRE no incisivo contido, modificam o balanço na relação RANKL/OPG alterando o metabolismo das células que participam da remodelação óssea

Abstract: In the rat incisors the face of the socket related to the enamel is resorpted continually on the inner side and formed on the outer side. A study accomplished at our laboratory showed that in rat incisors immobilized by a period of 18 days, there is a replacement of bone resorption in the face of the socket related to the enamel by bone formation, where osteoclasts were substituted by osteoblasts. CSF-1 and RANKL stimulate the proliferation and osteoclast differentiation while OPG has a potent osteoclastogenesis inhibitory activity. The aim of this study was to analyze the distribution and intensity of CSF-1, RANKL and OPG in periodontal tissues related to the enamel (PRE) of rat lower incisors, in normal eruption and after the period of 18 days of containment, using immunohistochemical technique and associating the quantitative analysis of osteoclasts. Fifteen male Wistar rats had their left lower incisor immobilized by means of a steel wire attached to the first left lower molar for 18 days. Fifteen rats with the left lower incisor in normal eruption were used as control. The eruption rate was measured using landmarks in the labial face of the crown. The animals were killed on day 18th and the region of the alveolar crest of the incisor was split. The incisors of 12 rats (6 control and 6 immobilized) were fixed and processed for embedding in Paraplast and immunohistochemical assay was accomplished using primary antibodies anti-CSF-1, OPG and RANKL. The immunostaining of the dental follicle was quantified by measure of the optical density, using the image analysis software Leica QWin (Leica imaging systems, Cambridge, UK) and both groups were compared by test t. To verify osteoclast activity, the incisors of 18 rats (9 control and 9 immobilized) were fixed and processed for embedding in Historesin and to make the tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) evident. Osteoclasts TRAP positive in the whole length of the alveolar bone surrounding the enamel were counted. The incisor immobilization with steel wire was efficient. The difference in the number of osteoclasts between both rat groups was significant (p<0.001). In the normal incisor, the number of osteoclasts was threefold greater than in the immobilized tooth. In the dental follicle, there wasn't significant difference in the immunostaining intensity for CSF-1 and OPG between the groups (p>0.05). The immobilized incisor group showed immunostained intensity smaller than the normal incisor group (p <0.01). The studied molecules were present in PRE, in the region of the alveolar crest of rat lower incisor, in normal and immobilized eruption. There was a decrease in the intensity of RANKL immunostaining and in the number of osteoclasts in the immobilized condition. Hence, we concluded that changes in tissues of PRE, in the immobilized incisor, modify the RANKL/OPG ratio altering the metabolism of cells that participate in the bone remodeling
Subject: Imuno-histoquímica
Incisivos (Dentes)
Remodelação óssea
Dentes - Erupção
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: NEVES, Juliana dos Santos. Imunolocalização de CSF-1, OPG e RANKL no periodonto relacionado ao esmalte de incisivos de ratos em erupção normal e contida. 2008. 42p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Piracicaba, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/288484>. Acesso em: 10 ago. 2018.
Date Issue: 2008
Appears in Collections:FOP - Tese e Dissertação

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