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Type: Artigo de periódico
Title: Purification and properties of asparaginase from the testa of immature seeds of pea (Pisum sativum L.)
Author: Chagas, Eliana P.
Sodek, Ladaslav
Abstract: A K+-dependent asparaginase (E.C. 3.5.1.1.) was purified 1328-fold from the testas of immature pea seeds (Pisum sativum L., var. Bolero) and characterized. Antibodies raised against purified asparaginase cross-reacted with the putative asparaginase band in Western blot analyses of semi-purified extracts. However, for crude extracts of pea testas, a cross-reaction was obtained with at least four protein bands, one of which was asparaginase protein. Affinity-purified antibodies to the four strongest bands of crude extracts were fairly specific for the bands from which they were purified, suggesting a mixture of specific antibodies. The Mr of asparaginase was 69,000 by Sephacryl S200 chromatography and also by mobility on native PAGE relative to BSA. There was no evidence for dissociation into subunits on SDS-PAGE, suggesting a monomeric protein of Mr 69,000. Other properties include an apparent Km of 2.4 mM, pI between 4.5 and 5, and competitive inhibition by aspartate and glycine.
Uma asparaginase dependente do K+ (E.C. 3.5.1.1.) foi purificada 1328 vezes a partir de testas de sementes imaturas de ervilha (Pisum sativum L., var. Bolero) e caracterizada. Anticorpos obtidos a partir da asparaginase purificada, usados como sonda em ensaios tipo Western blot, reagiram com a banda da asparaginase de extratos semi-purificados. Entretanto, em ensaios realizados com extratos brutos de testas de ervilha, uma reação foi obtida com pelo menos 4 proteínas, entre elas a da asparaginase. O uso de anticorpos purificados por afinidade pelas 4 bandas mais evidentes do extrato bruto demonstraram um alto grau de especificidade para com as bandas de proteína das quais foram purificadas, indicando uma mistura de anticorpos específicos. A posição de eluição da atividade de asparaginase em Sephacryl S-200, bem como a sua mobilidade em PAGE não-denaturante relativo à BSA, sugere uma proteína de Mr 69.000. Em análise realizada por SDS-PAGE não foi obtida nenhuma evidência para a dissociação da proteína em subunidades, sugerindo que a proteína seja monomérica com Mr 69.000. Outras propriedades incluem um Km apparente de 2,4 mM, pI entre 4,5 e 5, e inibição competitiva pelo aspartato e pela glicina.
Subject: Pisum sativum
asparaginase
purification
properties
Editor: Instituto de Tecnologia do Paraná - Tecpar
Rights: aberto
Identifier DOI: 10.1590/S1516-89132001000300004
Address: http://dx.doi.org/10.1590/S1516-89132001000300004
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516-89132001000300004
Date Issue: 1-Sep-2001
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