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Type: TESE
Title: Extração de proteinas em um sistema de duas fases aquosas numa micro-coluna pulsada
Author: Leite, Patricia Bernardi
Advisor: Tambourgi, Elias Basile, 1957-
Abstract: Resumo: Os sistemas bifásicos aquosos têm sido largamente utilizados na pesquisa bioquímica para a separação e purificação de macromoléculas, células e partículas de origem celular. Nos últimos anos, os sistemas bifásicos também têm encontrado aplicações em diferentes áreas da biotecnologia, especialmente no que se refere a utilização de sistemas alternativos de baixo custo, como o sistema constituído por polissacarídeo da goma do cajueiro (POLI CAJU) e polietileno glicol (PEG). O exsudato de Anacardium occidentale L. consiste em um polissacarídeo ácido largamente encontrado no Nordeste brasileiro, onde é empregado como substituto da goma arábica para uso farmacêutico. A goma bruta foi coletada como exsudato natural de árvores cultivadas no estado de Pernambuco. Nódulos I ivres de cascas foram selecionados para o processo de isolamento da goma via precipitação por etanoI. Foram estabelecidos diagramas de fases para o sistema polissacarídeo da goma do cajueiro e polietileno glicol 1500,4000 e 8000 nos pH's 6,0, 7,0 e 8,0 para temperatura de 27 °C . Observou-se um deslocamento da binodal no sentido de maiores concentrações de polímeros com a diminuição do peso molecular do polietileno glicoI. A faixa de pH estudada, não acarretou alterações significativas na binodaI. Diferentes "tie-lines" foram analisadas para a determinação do coeficiente de partição de uma proteína modelo, a tripsina. A proteína se particionou predominantemente na fase inferior rica em POLI CAJU nas condições experimentais testadas. O aumento do comprimento da "tie-line" e do massa molar do polietileno glicol provocou, de modo geral, a redução do coeficiente de partição da tripsina. O coeficiente de partição não apresentou um comportamento regular com a variação da faixa de pH estudada. Em processamento contínuo, estudou-se o comportamento do sistema bifásico PEG­POLICAJU em coluna de campânulas pulsantes. O sistema selecionado para a transferência da tripsina da fase dispersa para a fase contínua foi o sistema obtido no processo em batelada: PEG 4000-POLlCAJU. Os estudos preliminares de transferência de tripsina numa coluna de campânulas pulsantes indicou que ocorreu uma recuperação de cerca de 40% de proteína na fase POLICAJU. (Condições: número de campânulas: 2; pulsação 1 :3; velocidade de pulsação: 2,0 mL/min)

Abstract: Aqueous two-phase systems have found widespread use in biochemical research for separation and purification of macromolecules, cells and cell partic1es. In recent years the aqueous two-phase systems have also found applications in various areas of biotechnology, specially when utilising low-cost biphasic systems, as the new aqueous two-phase system based on cashew-nut tree gum (POLICAJU) and poly(ethylene glycol) (PEG). The exsudate gum from Anacardium occidentale L. is a branched acidic heteropolysaccharide found in Brazilian north-westem. It's employed locally as a substitute for arabic gum in pharmaceutical uses. Crude gum was collected as natural exsudate from cultivated trees in Pemambuco state. Clear nodules free of bark were selected to be isolated via ethanol precipitation. Phase diagrams were provided for POLICAJU and PEG molecular weight of 1500, 4000 and 8000 at pH 6,0, 7,0 and 8,0, for 25°C. It was observed a displacement of the binodal for higher polymer concentrations when polyethylene glycol molecular weights decreased. The pH range studied, did not promote significant alterations on the binodal. Different tie-lines were analysed for partition coefficient determination of a model protein, trypsin. The protein partitioned almost in the bottom gum-rich phase for the experimental conditions tested. The increase of the tie-line length promoted and PEG molecular weight variation, in general, a decreased of the protein partition coefficient. The partition coefficient did not show a regular tendency with the pH range studied.
Subject: Extração por solventes
Caju
Separação (Tecnologia)
Biomoléculas
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2001
Appears in Collections:FEQ - Dissertação e Tese

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