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Type: TESE
Title: Cromatografia IMAC : estudos de adsorção de glucagon e insulina em silica-IDA-Me2+
Author: Farinas, Cristiane Sanchez
Advisor: Miranda, Everson Alves, 1959-
Abstract: Resumo: Glucagon é um hormônio que aumenta o nível de glicose sanguínea e sua principal aplicação como produto farmacêutico é no tratamento de hipoglicemia, especialmente associada ao diabetes. Além dessa importante aplicação e sendo o glucagon um produto de custo bastante elevado, existe a necessidade de se aprimorar seu processo- de purificação. O objetivo deste trabalho foi realizar estudos de adsorção de glucagon e insulina em silica-IDA- Me2+, através da técnica de cromatografia de afinidade por íons metálicos (IMAC), visando desenvolver um processo de purificação de glucagon a partir de fração de processamento industrial de insulina de pâncreas. Na primeira etapa, realizou-se experimentos em tanques agitados para determinar a cinética, capacidade de adsorção e influência do pH, força iônica e agente competidor na eluição do glucagon adsorvido em matriz silica-IDA-Cu2. A segunda etapa consistiu em experimentos em colunas de cromatografia líquida com leito fixo, com o glucagon, a insulina e a mistura deles, utilizando os metais Cu2+, Ni2+ e Zn2+. A condição que se mostrou mais promissora na separação da insulina do glucagon foi utilizando o metal níquel e eluição com gradiente degrau de pH. Esta condição foi avaliada na purificação de glucagon presente em duas frações do processamento industrial de insulina, a primeira rica em glucagon e uma segunda rica em insulina. O resultados mostraram um enriquecimento de glucagon em ambas as frações, sendo que um fator de purificação de glucagon de cinco foi obtido para a fração rica em insulina

Abstract: Glucagon is a hormone that increases blood glucose concentration and is used as a pharmaceutical product mainly in cases of hypoglycemia associated with diabetes. Given both its importance and cwrent1y high oost, improved purification processes are on demando Adsorption studies of glucagon and insulin on adsorbents of silica-IDA-Me2+ were carried out. By using immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC), we conducted tests aimed at purifying glucagon present in an industrial insulin processing fraction. This method of separation is based on the se1ective mteractioD of a metal ion with aminoacid residues (specially histidine) present on the protein surface. Preliminary, experiments in stirred tanks were performed in order to determine the kinetics, adsorption isotherm and the influence of pH and ionic strength on adsorption. Next, fIxed bed chromatographic experiments with glucagon, insulin and a mixture of them was carried. Strong adsorption has been verüied for alI metais tested (Cu2+, Ni2+ and Zn2+). The most promising condition for glucagon and insulin separation was using Ni2+ as the metal ligant and desorption with pH step gradient. Studies with two industrial insulin processing fractions under this condition, one glucagon-rich and another insulin-rtch showed an increase in glucagon purity for both fractions with a purification factor of five for the latter fraction
Subject: Insulina
Cromatografia de afinidade
Quelatos
Íons metálicos
Adsorção
Proteínas
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2001
Appears in Collections:FEQ - Dissertação e Tese

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