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Type: TESE
Title: Plasma rico em plaquetas associado a ácido hialurônico e/ ou quitosana para aplicações em medicina regenerativa = Platelet-rich plasma associated to hyaluronic acid and/ or chitosan for applications in regenerative medicine
Title Alternative: Platelet-rich plasma associated to hyaluronic acid and/ or chitosan for applications in regenerative medicine
Author: Shimojo, Andréa Arruda Martins, 1971-
Advisor: Santana, Maria Helena Andrade, 1951-
Abstract: Resumo: Este trabalho teve como objetivo estudar o desempenho in vitro do plasma rico em plaquetas (PRP) com scaffolds de ácido hialurônico (AH) ou quitosana (CHT) como um scaffold compósito para a proliferação e diferenciação osteogênica de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano (h-AdMSCs). O PRP é um produto autólogo obtido do sangue total (WB). O ácido hialurônico é um glicosaminoglicano e principal componente do fluido sinovial. A quitosana é um polissacarídeo natural encontrado principalmente na carapaça de crustáceos. O PRP puro (P-PRP, rico em plaquetas e pobre em leucócitos) foi obtido a partir da centrifugação controlada do WB, e ativado com os agonistas soro autólogo e cálcio. Os scaffolds foram estruturados em micropartículas ou esponjas, para atender os requisitos de formulações injetáveis ou sólidas, respectivamente. Nesse contexto, os seguintes scaffolds foram preparados e caracterizados: sólidos porosos (esponjas) de quitosana não estabilizados (PCHTs) e estabilizados (SPCHTs); micropartículas de quitosana-tripolifosfato de sódio (iCHT-TPPs); micropartículas e esponjas de ácido hialurônico autorreticulado (ACPs) e de ácido hialurônico reticulado com 1,4-butanodiol diglicidil éter (HA-BDDE); e esponjas e micropartículas de ACP e CHT (PECs). PCHTs foram preparados por congelamento e liofilização de soluções de CHT, variando a concentração e as condições de congelamento. As estabilizações foram realizadas pelo tratamento dos PCHTs com hidróxido de sódio, série de etanol ou reticulação com tripolifosfato. Os iCHT-TPPs foram preparados por reticulação iônica de quitosana com TPP em diferentes razões mássicas. ACPs foram obtidos por autoesterificação organocatalisada. HA-BDDE foi preparado por eterificação dos grupos hidroxílicos do HA com o epóxido BDDE. PECs foram preparados por reticulação iônica do ACP com a CHT. Para a preparação de scaffolds compósitos, P-PRP ativado contendo h-AdMSCs foi imediatamente pipetado sobre a superfície dos scaffolds. Os resultados mostraram que os scaffolds não apresentam citotoxicidade. Micrografias obtidas por microscopia eletrônica de varredura mostraram compatibilidade estrutural com as redes de fibrina formadas no interior dos poros ou na superfície de scaffolds compósitos. Os scaffolds compósitos estimularam o crescimento de h-AdMSCs e a diferenciação osteogênica. Os scaffolds compósitos também promoveram liberação gradual dos fatores de crescimento PDGF-AB e TGF-?1. Assim, concluímos que os scaffolds compósitos estudados neste trabalho são promissores para engenharia de tecidos, particularmente para a cicatrização e regeneração óssea, no âmbito da medicina regenerativa

Abstract: This work aimed to study the in vitro performance of platelet-rich plasma (PRP) with scaffolds of hyaluronic acid (HA) and/ or chitosan (CHT) as a composite scaffold for proliferation and osteogenic differentiation of human adipose-derived mesenchymal stem cells (h-AdMSCs). The PRP is an autologous product obtained from whole blood (WB). Hyaluronic acid is a glycosaminoglycan and the main component of the synovial fluid. Chitosan is a natural polysaccharide found mainly in the carapace of crustaceans. The pure PRP (P-PRP, rich in platelet and poor in leukocytes) was obtained from controlled centrifugation of WB, and activated with the agonists autologous serum and calcium. The scaffolds were structured in microparticles or sponges, to comply the requirements of injectable or solid formulations, respectively. In this context, the following scaffolds were prepared and characterized: chitosan porous solid (sponge) unstabilized (PCHTs) and stabilized (SPCHTs); chitosan-sodium tripolyphosphate microparticles (iCHT-TPPs); microparticles and sponges of auto-crosslinked hyaluronic acid (ACPs) and of hyaluronic acid crosslinked with 1,4-butanediol diglycidyl ether (HA-BDDE); and microparticles and sponges of ACP and CHT (PECs). PCHTs were prepared by freezing and lyophilization of CHT solutions, varying the concentration and freezing conditions. Stabilization was performed by treating the PCHTs with sodium hydroxide, an ethanol series or by crosslinking with tripolyphosphate. The iCHT-TPPs were prepared by ionic crosslinking of chitosan with TPP at different mass ratios. ACPs was prepared by organocatalyzed auto-esterification. HA-BDDE was prepared by etherification of the hydroxyl groups of HA with the epoxide BDDE. PECs were prepared by ionic crosslinking of ACP with CHT. For the preparation of composite scaffolds, activated P-PRP containing h-AdMSCs was immediately pipetted onto the surface of the scaffolds. The results showed that the scaffolds do not exhibit cytotoxicity. Micrographs obtained by scanning electron microscopy (SEM) showed structural compatibility with fibrin networks formed inside the pores or on the surface of scaffolds. The composite scaffolds stimulated the growth of h-AdMSCs and osteogenic differentiation. Composite scaffolds also promoted gradual release of growth factors PDGF-AB and TGF-?1 and osteogenic differentiation. Thus, we conclude that the composite scaffolds studied in this work are promising for tissue engineering, particularly for healing and bone regeneration in regenerative medicine
Subject: Plasma rico em plaquetas
Ácido hialurônico
Quitosana
Biomateriais
Medicina regenerativa
Micropartículas
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2015
Appears in Collections:FEQ - Dissertação e Tese

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