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Type: TESE
Title: Produção de compostos volateis de aroma, pela expressão heterologa dos genes lipoxigenase 1 e hidroperoxido liase de vegetal em Saccharomyces cerevisiae
Author: Prazeres, Janaina Nicanuzia dos
Advisor: Pastore, Gláucia Maria, 1953-
Pastore, Glaucia M.
Abstract: Resumo: Lipoxigenases (LOX) catalizam a oxigenação de ácidos graxos polinsaturados, como o ácido linoléico, em hidroperóxidos, os quais via a ação sequencial das hidroperóxido liases produzem os compostos voláteis de aroma responsáveis pelo aroma de frescor de frutas, como o aldeído C6, hexanal. Os cDNAs que codificam a lipoxigenase, isoenzima 1, e hidroperóxido liase foram expressados em Saccharomyces cerevisiae, através do vetor pYES 2 (construções pYES2-LOX-1 e pYES2-HPL). A análise da seqüência parcial de nucleotídeos do cDNA de LOX-1 mostrou 96-99 % de similaridade com LOX-1 de soja (G/ycine max), enquanto que a análise da seqüência completa de nucleotídeos do cDNA de HPL mostrou 97% de similaridade com HPL de pimentão (Capsicum annuum). A análise de Northem blot foi usada para caracterizar a expressão dos dois genes em S. cerevisiae duplo recombinates. A primeira análise pelo Northem blot mostrou que ambos os genes foram expressos após 4 horas de indução, contudo a segunda análise mostrou que somente um dos dois foram expressos nas leveduras duplo recombinantes, o que demonstrou uma baixa estabilidade dos vetores. A análise de cromatografia gasosa foi usada para medir as quantidades de hexanal produzido. A produção de hexanal foi limitada em todas as leveduras estudadas, inclusive nos controles. Isto pode estar relacionado à expressão de apenas um dos genes nas S. cerevisiae duplo recombinantes.

Abstract: Lipoxygenase (LOX) catalyze the oxigenation of polyinsaturated fatty acids, such as linoleic acid, into hydroperoxides, which, via the sequential action of hydroperoxide Iyases (HPL), produce the aroma volatile compounds responsible for the fresh fruit flavor, notably the C6 aldeyde, the hexanal. The cDNAs encoding soybean lipoxygenase isoenzyme 1 and hydroperoxide Iyase were expressed in Saccharomyces cerevisiae, using the pYES 2 vector (pYES2-LOX-1 and pYES2-HPL constructions). Analysis of partial nucleotide sequence of LOX-1 cDNA showed 96-99 % similarity with LOX-1 soybean (G/ycine max), while HPL cDNA full nucleotide sequence analysis showed 97 % similarity with HPL bell pepper (Capsicum annuum). Northern blot analysis was used to characterize the expression patterns for two genes in double recombinant S. cerevisiae. The first Northern blot analysis showed that both genes were expressed after 4 hours, however the second analysis showed that only one of them were expressed in the double recombinant yeast, what may suggest a low vector stability. Gas chromatography analysis was used to measure quantities of hexanal production, which was limited in ali yeasts studied, including the controls. Limited hexanal production can be related to the only one gene expression in the double recombinant S. cerevisiae.
Subject: Saccharomyces cerevisiae
Aroma
Cromatografia de gás
Language: Português
Editor: [s.n.]
Date Issue: 2002
Appears in Collections:FEA - Dissertação e Tese

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