Please use this identifier to cite or link to this item: http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/333196
Type: TESE DIGITAL
Degree Level: Doutorado
Title: Caracterização molecular de Cryptosporidium spp. e Giardia duodenalis nos mananciais utilizados para o abastecimento urbano de Campinas, São Paulo, Brasil e comparação de dois métodos de filtração para detecção desses protozoários : Molecular characterization of Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis in the water sources used for the urban supply of Campinas, São Paulo, Brazil and comparision of two filtration methods for the detection of these protozoa
Title Alternative: Molecular characterization of Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis in the water sources used for the urban supply of Campinas, São Paulo, Brazil and comparision of two filtration methods for the detection of these protozoa
Author: Branco, Nilson, 1973-
Advisor: Franco, Regina Maura Bueno, 1958-
Abstract: Resumo: Dados sobre a ocorrência das diferentes espécies de Cryptosporidium e das assembleias de Giardia duodenalis em amostras de água bruta no Brasil são escassos. A escolha de um método capaz de detectar a presença desses protozoários nos mananciais é de extrema importância epidemiológica. O objetivo desse estudo foi realizar a caracterização molecular de cistos e oocistos detectados nos rios Atibaia e Capivari que são os principais mananciais que abastecem o município de Campinas, SP. Esses rios mostram-se eutrofizados dado que estão localizados em uma das regiões mais industrializadas do estado de São Paulo. Amostras de água bruta foram filtradas por dois diferentes métodos, sistema Filta-Max® (Iddex) e por Filtração em Membranas de ésteres mistos de celulose (47 mm de diâmetro) na qual adicionou-se uma etapa de eluição aquecida, objetivando-se a comparação entre esses dois procedimentos analíticos quanto à eficiência de recuperação de cistos e oocistos, empregando-se para tanto a suspensão comercial ColorSeed®. Os protozoários foram purificados por separação imunomagnética (IMS) e visualizados com o emprego de anticorpos monoclonais de acordo com o protocolo do Método 1623.1 da Agencia de Proteção Ambiental dos Estados Unidos. Amostras de água bruta de ambos os mananciais (n= 24) foram processadas mediante o método de referencia visando a caracterização molecular dos protozoários potencialmente patogênicos Cryptosporidium e Giardia. Empregou-se os marcadores moleculares SSU rRNA, beta-giardina, glutamato-desidrogenase e o espaçador transcrito interno do gene 5.8S para a caracterização molecular de G. duodenalis e, para Cryptosporidium sp, objetivou-se a amplificação de um fragmento de 830 pares de bases do gene 18S rRNA. Testes estatísticos demonstraram desempenho similar de ambas as metodologias em estudo quanto à eficiência de recuperação de cistos e oocistos; entretanto, esses procedimentos analíticos acarretaram em maior eficiência de recuperação de cistos que oocistos e, a turbidez exerceu efeito prejudicial na performance de ambas as metodologias em estudo como evidenciado pelo achado de correlação negativa entre turbidez e recuperações de cistos e oocistos. Cistos de Giardia sp ocorreram com maior frequência que oocistos de Cryptosporidium sp em ambos os mananciais. Para o Rio Atibaia, houve concordância entre os resultados para o marcador molecular SSU rRNA e visualização por imunofluorescência, sendo 100% das amostras positivas para cistos enquanto que 66,6% das amostras de água do Rio Capivari resultaram em amplificação. No Rio Atibaia, registrou-se a presença de duas espécies de Cryptosporidium quando empregado o marcador molecular 18S rRNA, a saber: C. hominis e C. parvum; a espécie C. meleagridis foi detectada em uma amostra de água bruta do rio Capivari, assim, essas três principais espécies infecciosas para o ser humano foram detectadas nos locais de captação dos mananciais utilizados para abastecimento público no município de Campinas, sendo tal achado relevante do ponto de vista de Saúde Publica. Para Giardia duodenalis, as análises de sequenciamento apontaram para a presença das assembleias AI e BIV nas amostras do rio Capivari e, no rio Atibaia, a ocorrência da assembleia A tendo-se observado diferenças quanto ao sucesso de amplificação, considerando os quatro marcadores moleculares utilizados. Clonagem do DNA de Cryptosporidium permitiu comprovar a presença de C. meleagridis em uma amostra de água do rio Capivari

Abstract: Data about the occurrence of various Cryptosporidium species and different Giardia duodenalis assemblages in water samples from Brazil yet are scarce. The selection of a filtration method able to detecting the presence of these protozoan parasites in water sources is of high epidemiological relevance. We investigate the occurrence of these pathogenic protozoa in raw water samples of Atibaia and Capivari River which are the main water supplies in Campinas city, São Paulo State. These rivers show high degrees of eutrophication as they are located in one of the most industrialized regions in São Paulo State. Samples were concentrated by membrane (47 mm of diameter) filtration technique added a heated elution step and/or by USEPA Method 1623.1 (method of reference) using the system Filta-Max®, aiming the comparison between these two analytical procedures through the recovery efficiencies of cysts and oocysts by using the ColorSeed® commercial suspension. Protozoa were purified by Immunomagnetic separation (IMS) and they were visualized by monoclonal antibodies label according with Method 1623.1. Raw water samples from both water sources were processed through the reference method objecting the molecular characterization of pathogenic protozoan parasites Cryptosporidium spp. and Giardia spp. The molecular markers SSUr RNA, beta-giardin, glutamate-desidrogenase and internal transcribed spacer of 5.8 gene were employed for the molecular characterization of G. duodenalis; for Cryptosporidium, the amplification of an 830 bp fragment of the 18S rRNA gene was used. Statistical analysis showed similar performance of both methodologies under study for cysts and oocysts recovery efficiencies; however, these analytical procedures resulted in a higher recovery efficiency of cysts than oocysts, and turbidity had a detrimental effect on performance of both methodologies as evidenced by our findings (negative correlation between turbidity and cysts/oocysts recoveries). Giardia sp cysts occurred more frequently than Cryptosporidium sp oocysts in both water sources. For Atibaia River, there was agreement between the results for SSU rRNA molecular marker amplification and immunofluorescence assay visualization, with 100% of samples positive for cysts while 66.6% of water samples from Capivari River resulted in amplification. In Atibaia River, the presence of two Cryptosporidium species was documented when the molecular marker 18S rRNA was utilized, namely: C. hominis and C. parvum; C. meleagridis was detected in a sample of raw water of Capivari River; thus, these three main infectious species for humans were detected at the catchment sites of water sources intended for public supply in Campinas city. These findings are relevant from a public health point of view. For G. duodenalis, sequencing analysis pointed to the presence of AI and BIV assemblages in raw water from Capivari River, and in the Atibaia River, the occurrence of assemblage A was detected. In this study, differences were observed regarding the success of amplification considered the four molecular markers used for G. duodenalis. Cloning of DNA of Cryptosporidium allowed to confirm the presence of C. meleagridis in one Capivari River water sample
Subject: Cryptosporidium
Giardia
Mananciais
Marcadores moleculares
Técnicas de diagnóstico molecular
Água bruta - Análise
Language: Português
Editor: [s.n.]
Citation: BRANCO, Nilson. Caracterização molecular de Cryptosporidium spp. e Giardia duodenalis nos mananciais utilizados para o abastecimento urbano de Campinas, São Paulo, Brasil e comparação de dois métodos de filtração para detecção desses protozoários: Molecular characterization of Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis in the water sources used for the urban supply of Campinas, São Paulo, Brazil and comparision of two filtration methods for the detection of these protozoa. 2018. 1 recurso online (113 p.). Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP.
Date Issue: 2018
Appears in Collections:IB - Tese e Dissertação

Files in This Item:
File SizeFormat 
Branco_Nilson_D.pdf4.47 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.