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Type: TESE DIGITAL
Título : Citotoxicidade e apoptose causadas por L-aminoácido oxidase de peçonha de "Bothrops jararaca" em macrófagos alveolares de ratos
Otros títulos : Cytotoxicity and apoptosis caused by L-amino acid oxidase from Bothrops jararaca snake venom in rat lung macrophages
Autor : Pereira, Beatriz Barroso, 1990-
Advisor: Hyslop, Stephen, 1964-
Resumen : Resumo: A L-aminoácido oxidase (LAAO) é uma enzima amplamente distribuída em peçonhas animais, especialmente de serpentes. Diversos estudos já demonstraram que as LAAOs exercem uma variedade de atividades biológicas, tais como inibição ou estimulação da agregação plaquetária, formação de edema e indução de apoptose, além de ação antimicrobiana, antiviral, antiparasitária e antitumoral. Acredita-se que a maioria das atividades biológicas da LAAO seja devido à liberação de H2O2 durante sua atividade enzimática. Os macrófagos desempenham papel importante na resposta inflamatória, tendo a capacidade de liberar citocinas e outros mediadores, como espécies reativas de oxigênio (EROs) e nitrogênio (ERNs). Neste trabalho, a atividade citotóxica e apoptótica de uma isoforma de 88 kDa de LAAO (BJarLAAO88) purificada da peçonha de B. jararaca através de uma combinação de cromatografias de gel filtração e troca iônica foi avaliada em macrófagos alveolares de rato. A peçonha de B. jararaca (10-1000 µg/ml) e a BJarLAAO88 (2,5-250 U/ml) foram citotóxicas em macrófagos em apenas 2 h. A citotoxicidade foi confirmada pela liberação de lactato desidrogenase (LDH) para o meio extracelular. A BJarLAAO88 estimulou a produção de EROs intracelulares, H2O2 e NO por macrófagos e induziu a peroxidação lipídica (pelo aumento da formação de malondialdeído). Quando coincubados com LAAO, a superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e aminoguanidina (AG) reverteram parcialmente ou totalmente a citotoxicidade, e atenuaram a formação de EROs e ERNs. BJarLAAO88 alterou o potencial de membrana mitocondrial e seu efeito foi abolido pela incubação com CAT e AG, mas não com SOD. A fragmentação de DNA e aumento das atividades das caspases 3, 8 e 9, indicadores de apoptose, foram vistos em macrófagos incubados com BJarLAAO88; o aumento da atividade das caspases foi inibido ou abolido pela SOD, CAT e AG. Estes resultados mostram que LAAO da peçonha de B. jararaca é citotóxica para macrófagos alveolares de rato principalmente pela produção de H2O2 e subsequente formação de EROs e ERNs. Essas espécies reativas causam peroxidação lipídica e ativação das vias intrínseca e extrínseca da apoptose. Essas atividades da LAAO podem ser um fator relevante nas respostas locais ao envenenamento por B. jararaca

Abstract: L-Amino acid oxidase (LAAO), an enzyme widely distributed in animal venoms, exerts biological activities such as inhibition or stimulation of platelet aggregation, edema formation and induction of apoptosis, as well as antimicrobial, antiviral, antiparasite and antitumoral activities. Many of these activities are mediated by H2O2 formed during LAAO activity. Macrophages play an important role in the inflammatory response to Bothrops venoms by releasing cytokines and mediators such as oxygen reactive species (ROS) and nitrogen reactive species (RNS). In this work, the cytotoxicity and apoptotic activity of an 88 kDa LAAO isoform (BJarLAAO88) purified from Bothrops jararaca venom by a combination of gel filtration and ion exchange cromatographies was assessed in rat alveolar macrophages. Bothrops jararaca venom (10-1000 µg/ml) and BJarLAAO88 (2.5-250 U/ml) were cytotoxic to macrophages after only 2 h. Cytotoxicity was confirmed by the release of lactate dehydrogenase. BJarLAAO88 stimulated ROS, H2O2 and nitric oxide (NO) production by macrophages and induced lipid peroxidation (seen as increased malondialdehyde formation). When co-incubated with LAAO, superoxide-dismutase (SOD), catalase (CAT) and aminoguanidine (AG) partially or totally reversed the cytotoxicity and attenuated ROS and RNS formation. BJarLAAO88 partially dissipated the mitochondrial membrane potential and this effect was largely abolished by co-incubation with CAT and AG, but not by SOD. DNA fragmentation and increased activity of caspases 3, 8 and 9, indicative of apoptosis, were seen in macrophages incubated with BJarLAAO88; the increases in caspase activities were markedly inhibited or abolished by SOD, CAT and AG. Together, these results show that B. jararaca LAAO is cytotoxic to rat alveolar macrophages primarily via the production of H2O2 and subsequent formation of ROS and RNS. These reactive species cause lipid peroxidation and activation of the intrinsic and extrinsic pathways of apoptosis. These activities of LAAO could be a relevant factor in the local responses to envenoming by B. jararaca
Palabras clave : L-aminoácido oxidase
Apoptose
Bothrops jararaca
Estresse oxidativo
Macrofagos
Peçonhas
Editorial : [s.n.]
Fecha de publicación : 2017
Aparece en las colecciones: FCM - Tese e Dissertação

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