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dc.contributor.CRUESPUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASpt_BR
dc.descriptionOrientador: Juliana Velasco de Castro Oliveirapt_BR
dc.descriptionDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologiapt_BR
dc.format.extent1 recurso online (153 p.) : il., digital, arquivo PDF.pt_BR
dc.format.mimetypeapplication/pdfpt_BR
dc.languageMultilínguapt_BR
dc.relation.requiresRequisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFpt_BR
dc.typeTESE DIGITALpt_BR
dc.titleAnálise do secretoma de Pseudozyma brasiliensis e clonagem, expressão e caracterização de hemicelulases = Secretome analysis of Pseudozyma brasiliensis and cloning, expression and characterization of hemicellulasespt_BR
dc.title.alternativeSecretome analysis of Pseudozyma brasiliensis and cloning, expression and characterization of hemicellulasespt_BR
dc.contributor.authorKaupert Neto, Antonio Adalberto, 1991-pt_BR
dc.contributor.advisorOliveira, Juliana Velasco de Castropt_BR
dc.contributor.institutionUniversidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologiapt_BR
dc.contributor.nameofprogramPrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.subjectSecretomapt_BR
dc.subjectClonagempt_BR
dc.subjectExpressão heterólogapt_BR
dc.subjectEnzimaspt_BR
dc.subjectCaracterizaçãopt_BR
dc.subject.otherlanguageSecretomeen
dc.subject.otherlanguageCloningen
dc.subject.otherlanguageHeterologous expressionen
dc.subject.otherlanguageEnzymesen
dc.subject.otherlanguageCharacterizationen
dc.description.abstractResumo: Atualmente, o uso de etanol como fonte de energia atrai o interesse de investimentos por ser inesgotável e de baixo impacto ambiental. No Brasil, a matéria-prima para sua produção é a cana-de-açúcar (cana), que gera como subproduto o bagaço. Este material lignocelulósico (formado principalmente por celulose, hemicelulose e uma menor porcentagem de outros compostos) pode ser utilizado para a produção do etanol de segunda geração. A hemicelulose da cana é composta por polímeros de pentoses e, para sua redução à monômeros fermentescíveis, é necessário principalmente duas enzimas hidrolíticas: a xilanase e beta-xilosidase. Em busca de novos microrganismos produtores destas enzimas, nosso grupo recentemente identificou uma nova espécie de levedura xilanolítica, denominada Pseudozyma brasiliensis (atual Kalmanozyma brasiliensis). Assim, este projeto teve como principal objetivo o estudo do secretoma desta espécie e caracterização de beta-xilosidases. Como resultado, o seu secretoma apresentou atividade referente a uma pequena gama de enzimas, porém interessantes para a quebra da parede celular vegetal, tais como xilanase, beta-xilosidase, beta-glicosidase e mananase. Por espectrometria de massas, além das enzimas que putativamente são responsáveis por estas atividades, também foram identificadas outras com atividades auxiliares e esterases. Em relação a beta-xilosidase, foram identificadas duas possíveis candidatas pertencentes à família 3 das glicosil hidrolases, secretadas apenas em xilano (GH3_80 e GH3_98). Com o objetivo de caracterizá-las, as expressões heterólogas destas enzimas foram realizadas em Escherichia coli, entretanto, estas se apresentaram insolúveis e inativas, provavelmente devido às modificações pós traducionais que estas cepas são incapazes de realizar. Em seguida, a GH3_80 foi produzida heterologamente em Pichia pastoris e os resultados sugerem que ela possui atividade de beta-glicosidase e beta-xilosidase. Adicionalmente, uma xilanase da família 11 foi produzida heterologamente em E. coli, purificada, cristalizada, caracterizada estruturalmente por cristalografia de raios-x. Além disso, esta xilanase está entre as 3 enzimas com maior atividade específica já registrada no BRENDA, com valores próximos a 11500 U/mgpt
dc.description.abstractAbstract: Currently, ethanol production is attracting investments since it represents a renewable energy source with few environmental impacts. In Brazil, ethanol is produced from sugarcane, generating bagasse as a byproduct. This lignocellulosic biomass can be used for the production of so-called second generation ethanol. The hemicellulose of sugarcane is composed mostly of pentose polymers, and to reduce it to fermentable monomers, it is necessary mainly two hydrolytic enzymes: endo-xylanase and beta-xylosidase. In search of for new sources of these enzymes, our group recently identified a new species of a xylanolytic yeast-like fungi called Pseudozyma brasiliensis (current Kalmanozyma brasiliensis). Therefore, the main objective of this project was to study the K. brasiliensis secretome and characterize beta-xylosidases. Its secretome showed activity realated to a small range of enzymes, but very interesting for breaking the plant cell wall, such as endo-xylanase, beta-xylosidase, beta-glucosidase and endo-mannanase. In addition to the enzymes that are putatively responsible for these activities, the mass spectrometry analysis also identified enzymes with auxiliary and esterase activities. Regarding beta-xylosidase, two possible candidates belonging to family 3 of the glycoside hydrolases,(GH3_80 and GH3_98) were identified secreted only on xylan. In order to characterize them, the heterologous expression of these enzymes were performed in Escherichia coli; however, the proteins presented insoluble and inactive, probably due to the post-translational modifications which are not performed in E. coli. Then GH3_80 was successfully produced in Pichia pastoris and the results suggest that it has beta-glucosidase and beta-xylosidase activity. Additionally, an endo-xylanase from glycoside hydrolase family 11 was produced heterologously in in E. coli, purified, crystallized and structurally characterized by x-ray difraction. The data o kinetics suggest that this xylanase is among the 3 enzymes with the highest specific activity already registered in BRENDA, with values close to 11500 U/mgen
dc.publisher[s.n.]pt_BR
dc.date.issued2016pt_BR
dc.identifier.citationKAUPERT NETO, Antonio Adalberto. Análise do secretoma de Pseudozyma brasiliensis e clonagem, expressão e caracterização de hemicelulases = Secretome analysis of Pseudozyma brasiliensis and cloning, expression and characterization of hemicellulases. 2016. 1 recurso online (153 p.). Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP.pt_BR
dc.description.degreelevelMestradopt_BR
dc.description.degreedisciplineGenetica de Microorganismospt_BR
dc.description.degreenameMestre em Genética e Biologia Molecularpt_BR
dc.contributor.committeepersonalnameDamásio, André Ricardo de Limapt_BR
dc.contributor.committeepersonalnameLiberato, Marcelo Vizonápt_BR
dc.date.defense2016-11-25T00:00:00Zpt_BR
dc.date.available2017-05-18T19:32:48Z
dc.date.available2017-07-19T12:49:16Z-
dc.date.accessioned2017-05-18T19:32:48Z
dc.date.accessioned2017-07-19T12:49:16Z-
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dc.identifier.urihttp://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/322054
dc.description.sponsorCAPESpt_BR
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