Orientador: Elias Basile Tambourgi

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química

Resumo: Avanços na biotecnologia têm possibilitado a produção de biomoléculas de interesse comercial. Dentre essas, se encontram as enzimas proteolíticas, que correspondem a mais de 65% do mercado total de enzimas. Essas estão envolvidas em processos biológicos essenciais e, além disso, apresentam...

Resumo: Avanços na biotecnologia têm possibilitado a produção de biomoléculas de interesse comercial. Dentre essas, se encontram as enzimas proteolíticas, que correspondem a mais de 65% do mercado total de enzimas. Essas estão envolvidas em processos biológicos essenciais e, além disso, apresentam diversas aplicações no ramo industrial, sendo utilizadas na indústria têxtil, farmacêutica e de alimentos, por exemplo. No Brasil, a maioria das proteases empregadas industrialmente é importada, sendo menos de 2% produzidas no país e se fazendo necessário o crescimento da produção nacional. Nesse contexto de produção de biomoléculas, se destaca a etapa de separação e purificação das mesmas, já que esta é responsável por 50 a 90% do custo total do processo. Desse modo, há a necessidade de elaboração de estratégias que viabilizem a produção de tais enzimas. Dessa forma, o presente projeto visa a produção, purificação e caracterização parcial de proteases do fungo filamentoso Penicillium citrinum. Inicialmente, foi avaliada a produção de protease por fermentação em estado sólido e em estado submerso. Foi observado que a fermentação em estado sólido foi mais produtiva, alcançando uma atividade proteolítica de 19,23 U/mL. Visando a concentração e purificação do extrato enzimático, foi realizada a precipitação de proteínas. Os procedimentos foram realizados a 20, 40, 60 e 80% de saturação, utilizando etanol e sulfato de amônio. A precipitação com sulfato de amônio se mostrou mais eficaz, atingindo uma atividade específica de 14,70 U/mg, fator de purificação de 1,43 vezes e recuperação de 52,96 %. De modo a avaliar a aplicabilidade das proteases obtidas, foram realizados testes de efeito de pH e de temperatura. Assim, foi verificado que as enzimas produzidas por Penicillium citrinum apresentaram um pH ótimo de 8,2 em tampão Tris HCl, e uma temperatura ótima de 50ºC, indicando uma potencial aplicação na indústria de detergentes e do couro

Abstract: Advances in biotechnology enabled the production of biomolecules of commercial interest. These include proteolytic enzymes, which account over 65% of the total enzyme market. These are involved in essential biological processes and have various applications in the industrial field, like in...

Abstract: Advances in biotechnology enabled the production of biomolecules of commercial interest. These include proteolytic enzymes, which account over 65% of the total enzyme market. These are involved in essential biological processes and have various applications in the industrial field, like in textile, pharmaceutical and food industries. In Brazil, since less than 2% are produced in the country, most of the industrially employed proteases are imported, making the increase of production necessary. In this context of production of biomolecules, the downstream processing is highlighted, due to the fact that it's responsible for 50 to 90% of the total cost of the process. Thus, the development of strategies that enable the production of such enzymes are needed. Therefore, the present project aims at the production, purification and partial characterization of proteases of the filamentous fungus Penicillium citrinum. Initially, protease production was avaluated by solid state and submerged fermentation It was observed that the solid state fermentation was more productive, reaching a proteolytic activity of 19,23 U/mL. In order to concentrate and purificate of the enzyme extract, protein precipitation was performed. The procedures were performed at 20, 40, 60 and 80% of saturation, using ethanol and ammonium sulfate. Ammonium sulfate precipitation was more effective, reaching a specific activity of 14.70 U/mg, a 1.43 fold purification factor and a 52.96% recovery. To evaluate the applicability of the proteases obtained, pH and temperature effect tests were performed. Thus, it was verified that the enzymes produced by Penicillium citrinum had an optimum pH of 8.2 in Tris HCl buffer, and an optimum temperature of 50ºC, indicating a potential application in the detergent and leather industry

Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDF